背景及概述[1][2]
华蟾素来源于中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)或黑眶蟾蜍(Bufomelanostictus Schneider)的皮经过提取分离得到，是我国自行研制的二类新药和国家中药保护品种。华蟾素对多种肿瘤细胞有不同程度的抑制作用，近年来关于华蟾素能够诱导肝癌、胃癌等肿瘤细胞的凋亡、抑制癌基因表达的研究较多。华蟾素具有抑制肿瘤细胞生长和刺激免疫系统的双重作用。临床实践证明，华蟾素可增加患者对放疗、化疗的耐受性，提高肿瘤细胞的敏感性，提高疗效，减轻放疗、化疗的剂量，改善肿瘤患者的生存质量，延长生存期。目前在抗肿瘤、治疗慢性乙型肝炎以及其他疾病的临床治疗上已经得到广泛的应用。华蟾素注射液、口服液、片剂均为我国的中药保护品种，其主要有效成分为吲哚类生物碱、蟾蜍色胺、蟾蜍季胺、蟾蜍噻咛和脱氢蟾蜍色胺等，其中国家药品标准中将吲哚类生物碱(以5-羟色胺计)含量作为华蟾素的质量指标。
制备[1]
目前已报道的华蟾素提取工艺主要有水提醇沉法、醇提水沉法，但这些工艺的研发都遇到了瓶颈，因此如何探索一种新型的高浓度华蟾素提取物的制备方法，成为了当下的研究趋势。CN201610794722.8 提供一种高浓度华蟾素提取物的制备方法，以达到提高有效成分含量，提高生产效率的目的。
本发明的技术方案概述如下：
一种高浓度华蟾素提取物的制备方法，其包括以下步骤：
S1：将蟾皮真空干燥、粉碎，得蟾皮粉；
S2：将所述蟾皮粉置于酶解罐中，加入蒸馏水，搅拌均匀后，加入盐酸调节pH至酸性，加热，加入胃蛋白酶搅拌，保温酶解；
S3：加入氢氧化钠调节pH至中性，加热煮沸30min，离心，取上清液，得华蟾素提取液；
S4：将所述华蟾素提取液冷却至40℃后经吸附树脂吸附，采用梯度洗脱法，先用60％的乙醇对吸附树脂进行洗脱，再用80％的乙醇对吸附树脂进行洗脱，收集洗脱液；
S5：将洗脱液减压浓缩至无醇味，得华蟾素提取物。
本发明的有益效果是：本案通过采用胃蛋白酶来分解蟾皮，从而释放出华蟾素，并借助吸附树脂吸附和梯度洗脱来提高有效物质的转移率和华蟾素提取物吲哚类生物碱的含量，降低了生产成本，提高了提取效率。
制剂[3]
制备含有0.1％华蟾素的华蟾素注射乳剂：
称取华蟾素1.0g，月见草油和芝麻油各200g，氢醌10g，水浴加热至 45℃，搅拌溶解得油相。量取注射用水770ml，加入蔗糖和氯化钠各10g，蛋黄磷脂50g和醋酸酯50g加热至45℃溶解搅拌，得水相。将油相和水相在45℃下混合，剪切乳化90分钟(转速20转/分)，使油相和水相混匀。用乙二胺溶液(5％)调节其pH值为7.5，得初乳。将初乳用机械搅拌乳化(转速为2000转/分)100分钟，分装，充氮，高压蒸汽消毒，115℃灭菌30分钟，得产物华蟾素注射乳剂1050ml。该乳剂平均粒径3.0μm，华蟾素含量为0.095％，为标识量的95％。按体重1.0mg/kg缓慢滴注，1日1次。小儿稍减。
药理毒理[2]
1、抗肿瘤作用：华蟾素3g生药/kg对小鼠移植性肿瘤S180肉瘤、H22肝癌具有明显的抑瘤作用，对L1210白血病小鼠有明显延长生命的倾向。华蟾素7.5g生药/kg对大鼠W256的抑制率为63.7%。
体外药物试验表明华蟾素生药2mg/ml对三种消化系统肿瘤株（人肝癌SMMC-7721、人胃癌MKN45、人结肠癌LOVO）均有杀伤作用，其机制为直接杀伤肿瘤细胞DNA，导致肿瘤细胞坏死。从分子水平观察华蟾素有使H22肝癌荷瘤小鼠血浆内cAMP含量升高，并使cAMP/cGMP比值恢复正常的作用。
华蟾素对S180肉瘤小鼠单用抑制率为35.5%，与CTX联合应用后抑制率提高到71%，疗效优于CTX单独用药，表明华蟾素与CTX联合应用具有协同作用，临床资料也表明华蟾素与5-Fu、CTX、MTX、VCR联合应用具有协同作用，化疗与华蟾素联合应用的疗效比单独用药治疗明显提高，并能减轻放疗辐射与化疗的毒副作用。
2、免疫促进作用：华蟾素对CTX所致白细胞减少症有防治作用，能提高小鼠淋巴细胞比率，也可提高小鼠血清中IgG、IgA、IgM的含量；试验资料也表明华蟾素具有增强体液免疫和细胞免疫的功能。
3、抗病毒作用：试验证明，华蟾素对2215细胞及鸭乙肝病毒均有明显的抑制其复制作用。
临床应用和适应症[2]
解毒，消肿，止痛。临床主要用于中、晚期肿瘤的治疗，亦可用于慢性乙型肝炎等症。
药物相互作用[2]
如与其他药物同时使用可能会发生药物相互作用，详情请咨询医师或药师。
注意事项[2]
口服初期偶有腹痛、腹泻等胃肠道刺激反应。如无其他严重情况，不需停药，继续使用，症状会减轻或消失。
主要参考资料
[1] CN201610794722.8 高浓度华蟾素提取物的制备方法
[2] 华蟾素胶囊(肠溶胶囊)说明书
[3] CN200610032877.4 华蟾素注射乳剂及其制备方法