背景[1-6]
鸡抗体IgY测序服务采用DASS（Database Assisted Shotgun Sequencing）技术，结合现有技术的优势，可对抗体进行卓越、快速、精准的分析。DASS（Database Assisted Shotgun Sequencing)技术，通过使用最先进的质谱仪和强大的数据处理算法，生成大量序列信息，进而运用最新计算程序对MS/MS光谱从头测序，利用其独特的内部数据挖掘工具保证我们从上万条MS/MS光谱数据中提取目标抗体序列信息。
鸡的IgY抗体在一定程度上相当与哺乳动物的IgG抗体，与哺乳动物的IgG抗体相比，鸡IgY拥有更高的亲和力，更低的交叉反应性和更高的特异性，这些优点使IgY抗体在实验室的科学研究和诊断领域中更有应用价值。IgY是一种存在于鸟类、爬行动物和两栖动物的血清中的主要免疫球蛋白。受免疫刺激后，母鸡产生免疫反应，在输卵管内卵黄成熟期，IgY由血清转运到卵黄，可以为胚胎提供被动免疫，这与哺乳动物中IgG的转运可以为新生儿提供被动免疫的过程类似。正常鸡IgY的分子量约为180KDa，由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成，分子量分别为60-70KDa和22-30KDa。其等电点约为5.2。
IgY与IgG的一个主要区别是Y抗体不能够与细菌Fc受体如Protein A或Protein G结合。其次，IgY具有较好的稳定性，其有较强的耐热、耐酸、抗离子强度和一定的抗酶降解能力。IgY在疾病防治和诊断方面都发挥着重要的作用。如抗人腹泻病大肠杆菌IgY可使大肠杆菌聚集，从而抑制细菌的繁殖和生长，并促进大肠杆菌从肠道的排除；在食品中添加抗人轮状病毒IgY（HRV-IgY），可以预防婴儿和儿童的肠道疾病。
同样，IgY是理想的免疫学试验检测工具，其不仅可以制备针对特定病原生物的特异性抗体，用于对病原体的分离、鉴定，且不结合类风湿因子、不与蛋白A、蛋白G、哺乳动物FC受体、补体结合，与IgG几乎没有交叉反应。以此同时，鸡抗体IgY具有很广泛的应用和优势，例如鸡具有对哺乳动物抗原更好的免疫应答性，IgY在连续滴定中具有更高的亲和力，分离过程简单且成本低，生产高效且具有可伸缩性等。相比于哺乳动物IgG，IgY具有更高的特异性与灵敏性，可以增强免疫应答反应。
应用[7][8]
鸡抗体IgY测序服务可用于IgY抗体基因的扩增及表达实验中的测序服务。
为了扩增鸡IgY抗体基因全长序列,试验首先提取鸡脾脏总RNA,然后反转录成cDNA,按照NCBI上公布的鸡轻链抗体基因序列合成特异引物,利用PCR技术扩增出轻链ORF序列。根据已公布出的重链恒定区序列设计引物分别利用5’RACE和3’RACE法扩增后测序验证,将验证正确的两段序列通过DNAStar软件拼接后找到ORF序列,再次设计引物利用重叠PCR方法扩增出重链ORF序列。将轻、重链扩增出的目的条带分别连接到克隆载体上,经转化感受态细胞DH5a后,选取单菌落摇菌抽取质粒,经酶切和PCR双重验证正确的质粒送往公司测序。
参考文献
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[8]段真真.鸡传染性支气管炎病毒IgY抗体基因的扩增及表达[D].四川农业大学,2015.