背景[1-7]
反向染色质免疫共沉淀试剂盒是用特异的核酸探针捕获靶DNA片段及与其相结合的蛋白质,蛋白质用质谱仪检测,以达到确定靶DNA位点全部相关蛋白质的目的.其可对靶DNA位点相关蛋白质进行全面、系统地鉴定,特别是寻找已知DNA元件相应的调节蛋白的科研试剂盒反向染色质免疫共沉淀技术（reverse-Chromatin immunoprecipitation assay，reverse-ChIP）相对于染色质免疫共沉淀技术（ChIP），是一种在体内状态下分析DNA-蛋白质相互作用的新方法。
它用特异的核酸探针捕获靶DNA片段及与其相结合的蛋白质，并用质谱仪或Western Blot检测，以确定靶DNA位点全部结合蛋白质。将细胞内的蛋白质和DNA交联，超声波将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后用用特异的核酸探针捕获靶DNA片段及与其相结合的蛋白质，蛋白质用质谱仪或Western Blot检测，以确定靶DNA位点全部相关蛋白质。反向染色质免疫共沉淀（Reverse-ChIP），是一种游离染色质片段蛋白质组学技术（Proteomic Sofisolated Chromatinsegments，PICh），利用DNA探针和质谱（Mass Spectrometric）体内研究染色质结合蛋白。
染色体免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于体内分析发展起来的方法，也称结合位点分析法，在过去十年已经成为表观遗传信息研究的主要方法。这项技术帮助研究者判断在细胞核中基因组的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰。ChIP不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。
近年来，这种技术得到不断的发展和完善。采用结合微阵列技术在染色体基因表达调控区域检查染色体活性，是深入分析癌症、心血管疾病以及中央神经系统紊乱等疾病的主要通路的一种非常有效的工具。
应用[8]
反向染色质免疫共沉淀试剂盒可对靶DNA位点相关蛋白质进行全面、系统地鉴定，特别是寻找已知DNA元件相应的调节蛋白。在发现、鉴定靶DNA位点相关蛋白质和研究DNA-蛋白质相互作用中有重要应用价值。例如在肿瘤抑制蛋白p53DNA结合结构域与靶基因相互作用的研究中p53基因在50%的肿瘤当中发生突变,而这些突变主要发生在序列特异性的DNA结合结构域,突变的p53不能激活下游基因转录。因此,序列特异性的DNA结合和转录激活活性是p53最关键的生物学功能。
参考文献
[1]Easily reversible desthiobiotin binding to streptavidin,avidin,.8.and other biotin-binding proteins:uses for protein labeling,detection,and isolation.Hirsch J D,Eslamizar L,Filanoski B J,et al.Analytical Biochemistry.2002
[2]A SILAC-based DNA protein interaction screen that identifies candidate binding proteins to functional DNA elements.Mittler G,Butter F,Mann M.Genome Research.2009
[3]Biotin-labeled oligonucleotides with extraordinarily long tethering arms.Morocho AM,Karamyshev V,Shcherbinina O,et al.Methods in Molecular Biology.2005
[4]Interaction of HTLV-1Tax and methyl-CpG-binding domain2positively regulates the gene expression from the hypermethylated LTR.Ego T,Tanaka Y,Shimotohno K.Oncegene.2005
[5]Stable isotope labeling by amino acids in cell culture,SILAC,as a simple and accurate approach to expression proteomics.Ong S E,Blagoev B,Kratchmarova I,et al.Molecular Cellular Proteomics.2002
[6]DNA methylation and human disease.Robertson KD.Nature Reviews Genetics.2005
[7]Purification of proteins associated with specific genomic Loci.Dejardin J.,Kingston R E.Cell.2009
[8]赵明明,齐锦生,栗彦宁.Reverse ChIP:研究DNA-蛋白质相互作用的新方法[J].中国生物化学与分子生物学报,2010,26(05):407-410.