Agar(琼脂粉)

2020/2/1 11:46:39

背景[1-6]

Agar(琼脂粉)由海藻中提取的多糖体,是目前世界上用途最广泛的海藻胶之一。它在食品工业、医药工业、日用化工、生物工程等许多方面有着广泛的应用,琼脂用于食品中能明显改变食品的品质,提高食品的档次。价格很高。其特点:具有凝固性,稳定性,能与一些物质形成络合物等物理化学性质,可用作增稠剂,凝固剂,悬浮剂,乳化剂,保鲜剂和稳定剂。琼脂平板或培养皿用于使用琼脂和其他营养素的混合物提供生长培养基,其中可以在显微镜下培养和观察微生物,包括细菌和真菌。

琼脂对许多生物来说是难以消化的,因此微生物生长不会影响使用的凝胶并且它保持稳定。琼脂的最有用特性是它的凝点和熔点之间的温度相差很大。它在水中需加热至95℃时才开始熔化,熔化后的溶液温度需降到40℃时才开始凝固,所以它是配制固体培养基的凝固剂。用琼脂配制的固体培养基,可用以进行高温培养而不熔化,在凝固之前接种时,也不致将培养物烫死。因此,琼脂是制备各种生物培养基中应用最广泛的一种凝固剂。琼脂的浓度,通常是液体培养基的1~1.5%。

琼脂通常作为粉末商业销售,其可以与水混合并且在用作生长培养基之前与明胶类似地制备。将其他成分添加到琼脂中以满足微生物的营养需求。琼脂糖培养基是多孔的,因此可用于测量微生物的运动性和迁移性。凝胶的孔隙率与培养基中琼脂糖的浓度直接相关,因此可以根据实验目标选择不同浓度。常见的鉴定分析包括在营养琼脂块内深处培养生物样品。

细胞将尝试在凝胶结构内生长。在整个凝胶中,运动物种将能够缓慢地迁移,然后可以看到渗透速率,而非运动物种将仅沿着由侵入性初始样品沉积引入的现在空路径显示生长。通常用于测量趋化性和趋化性的另一种设置利用琼脂糖下细胞迁移测定法,其中在细胞群和化学引诱物之间放置一层琼脂糖凝胶。随着浓度梯度从化学引诱物扩散到凝胶中,随后可以使用显微照相术观察需要不同刺激水平迁移的各种细胞群,因为它们沿着梯度向上穿过凝胶向着重力隧穿。

琼脂广泛用于植物生物学,因为它补充有营养和维生素混合物,其允许在无菌条件下培养皿中的幼苗发芽(假定种子也被灭菌)。拟南芥的营养和维生素补充是大多数实验条件下的标准。一般使用Murashige&Skoog(MS)营养混合物和Gamborg的B5维生素混合物。1.0%琼脂/0.44%MS+维生素dH 2 O溶液适合于正常生长温度之间的生长培养基。当使用琼脂时,在任何生长培养基中,重要的是要知道琼脂的凝固是pH依赖性的。凝固的范围在5.4-5.7之间。通常,KOH的应用是需要提高pH值在该范围内。一般准则是每250ml GM约600μl0.1MKOH。可以使用高压釜的液体循环对整个混合物进行灭菌。

应用[7][8]

Agar(琼脂粉)可用于琼脂糖凝胶电泳:

蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷,在电场中受力大小不同,因此跑的速度不同,根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6~9之间,离子强度0.02~0.05为最适。常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段。

参考文献

[1] Smith,A.(November 1,2005)."History of the Agar Plate".Laboratory News.Retrieved November 3,2012.

[2] Hesse,W.(1992).Translated by Gröschel,D.H.M."Walther and Angelina Hesse–Early Contributors to Bacteriology"(PDF).ASM News.58(8):425–428.Retrieved 22 January 2017.

[3] Lobban,Christopher S.;Wynne,Michael James(1981).The Biology of Seaweeds.University of California Press.pp.734–735.ISBN 9780520045859.

[4] Ewen Callaway(8 December 2015)."Lab staple agar hit by seaweed shortage".Nature News.Retrieved 22 January 2017.

[5] Balfour,Edward.(1885).The cyclopædia of India and of eastern and southern Asia:commercial,industrial and scientific,products of the mineral,vegetable,and animal kingdoms,useful arts and manufactures.B.Quaritch.p.71.

[6] Maeda H,Yamamoto R,Hirao K,Tochikubo O(January 2005)."Effects of agar(kanten)diet on obese patients with impaired glucose tolerance and type 2 diabetes".Diabetes,Obesity,and Metabolism.7(1):40–6.

[7] Pulsed field separation of large supercoiled and open-circular DNAs and its application to bacterial artificial chromosome cloning.Wang M,Lai E.Electrophoresis.1995

[8] 黄永莲.琼脂糖凝胶电泳实验技术研究[J].湛江师范学院学报,2009,30(06):83-85.

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