硫酸庆大霉素为氨基糖苷类的广谱抗菌药，与硫酸新霉素、硫酸卡那霉素和单卡那霉素等为同类抗生素。本文将介绍其鉴别、检查和含量测定的方法。
鉴别
（1）薄层色谱法
《中国药典》采用薄层色谱法鉴别硫酸庆大霉素。取本品与庆大霉素标准品，分别加水制成每 1ml 中含2.5mg 的溶液，吸取上述两种溶液各 2μl，分别点于同一硅胶 G 薄层板（临用前于 105℃活化 2 小时）上；另取三氯甲烷－甲醇－氨溶液（1∶1∶1）混合振摇，放置 1 小时，分取下层混合液为展开剂，展开，取出于 20～25℃晾干，置碘蒸气中显色，供试品溶液所显主斑点数、位置和颜色应与标准品溶液斑点数、位置和颜色相同。
（2）高效液相色谱法
在庆大霉素 C 组分测定项下记录的色谱图中，供试品溶液各主峰保留时间应与标准品溶液各主峰保留时间一致。《中国药典》规定薄层色谱法和高效液相色谱法可选做一项。
检查
（1）硫酸盐
本品为庆大霉素的硫酸盐，其中硫酸根含量的理沦值约为 34％，《中国药典》使用高效液相色谱法测定硫酸根的含量，规定限量为 32.0％～35.0％。
（2）庆大霉素 C 组分
庆大霉素是 C 组分的复合物，不同的 C 组分活性无明显差异，但其毒副作用不同，所以需控制 C 组分的相对含量。《中国药典》采用高效液相色谱法测定含量。
由于庆大霉素无紫外吸收，《中国药典》选择蒸发光散射检测器进行庆大霉素 C 组分的检测，采用标准曲线法测定各组分的含量。
含量测定
《中国药典》采用微生物法测定硫酸庆大霉素的含量，即：精密称取本品适量，加灭菌水定量制成每 1ml 中含1000 单位的溶液，照“抗生素微生物检定法”管碟法或浊度法测定，可信限率不得大于 7％。1000 庆大霉素单位相当于 1mg 庆大霉素。规定：本品按无水物计算，硫酸庆大霉素每 1mg 的效价不得少于 590 庆大霉素单位。