硫酸庆大霉素的制备

2020/8/17 11:56:55

背景及概述[1]

硫酸庆大霉素为氨基糖苷类抗生素,对各种革兰阴性细菌及革兰阳性细菌都有良好抗菌作用,对各种肠杆菌科细菌如大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、沙门菌属、志贺菌属、肠杆菌属、沙雷菌属及铜绿假单胞菌等有良好抗菌作用,奈瑟菌属和流感嗜血杆菌对该品中度敏感。对布鲁菌属、鼠疫杆菌、不动杆菌属、胎儿弯曲菌也有一定作用。对葡萄球菌属(包括金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌)中甲氧西林敏感菌株的约80%有良好抗菌作用,但甲氧西林耐药株则对该品多数耐药。对链球菌属和肺炎链球菌的作用较差,肠球菌属则对该品大多耐药,硫酸庆大霉素与β内酰胺类合用时,多数可获得协同抗菌作用。

制备[1]

硫酸庆大霉素的制备方法,包括以下步骤:

1)取庆大霉素沙土孢子置于孢子斜面培养基上进行孢子培养,培养温度为36℃,培养时间为10天,得到斜面培养后的庆大霉素孢子;

庆大霉素沙土孢子的制备方法为:

a、沙土孢子培养基的配方按重量百分比计为:可溶性淀粉1.0%,氯化钠(NaCl)0.05%,硝酸钾(KNO3)0.1%,碳酸钙(CaCO3)0.1%,磷酸氢二钾(K2HPO4)0.02%,麸皮1.8%,硫酸镁(MgSO4)0.02%,琼脂2.0%,余量为水(本实施例具体为可溶性淀粉1.0g,氯化钠(NaCl)0.05g,硝酸钾(KNO3)0.1g,碳酸钙(CaCO3)0.1g,磷酸氢二钾(K2HPO4)0.02g,麸皮1.8g,硫酸镁(MgSO4)0.02g,琼脂2.0g,水94.91g);配制好的沙土孢子培养基在每个茄子瓶中分装50ml,经温热灭菌后,斜放,凝固,温热灭菌条件为0.1MPa,30分钟;

b、于超净工作台上,在火焰保护下,用无菌接种棒挑取砂土孢子0.1g于茄子瓶斜面培养基内,先划中线,而后从下而上往两边划线,均匀铺开,塞好棉塞;

c、培养与保存:接种好的斜面包扎好后,37℃恒温室架上培养10天,培养好的孢子斜面,4℃冰箱储存待用;

孢子斜面培养基的配方按重量百分比计为:可溶性淀粉1.0%,氯化钠0.05%,硝酸钾0.1%,碳酸钙0.1%,磷酸氢二钾0.02%,麸皮1.8%,硫酸镁0.02%,琼脂2.0%,余量为水(本方法具体为可溶性淀粉1.0g,氯化钠0.05g,硝酸钾0.1g,碳酸钙0.1g,磷酸氢二钾0.02g,麸皮1.8g,硫酸镁0.02g,琼脂2.0g,水94.91g);

2)将步骤1)中得到的斜面培养后的庆大霉素孢子进行摇瓶培养,摇瓶培养的孢子接入量为:孢子斜面挖取0.25cm2接入一个摇瓶,培养温度为36℃,培养时间为42小时,得到庆大霉素摇瓶菌丝;

摇瓶培养基的配方按重量百分比计为:可溶性淀粉1.0%,氯化钠0.05%,硝酸钾0.1%,碳酸钙0.1%,磷酸氢二钾0.02%,麸皮1.8%,硫酸镁0.02%,琼脂2.0%,余量为水(本方法具体为可溶性淀粉1.0g,氯化钠0.05g,硝酸钾0.1g,碳酸钙0.1g,磷酸氢二钾0.02g,麸皮1.8g,硫酸镁0.02g,琼脂2.0g,水94.91g);

3)将步骤2)得到的庆大霉素摇瓶菌丝置于种子培养基上进行种子培养,种子培养的接入量为:庆大霉素摇瓶菌丝按种子培养基体积的千分之二接入摇瓶种子,培养温度为36℃,培养时间为48小时,得到庆大霉素种子培养物;

种子培养基的配方按重量百分比计为:淀粉1.5%,玉米粉1.5%,黄豆饼粉1.0%,硝酸钾0.05%,蛋白胨0.2%,二氯化钴(CoCl2)0.0005%,余量为水(本方法具体为淀粉1.5g,玉米粉1.5g,黄豆饼粉1.0g,硝酸钾0.05g,蛋白胨0.2g,二氯化钴(CoCl2)0.0005g,水为95.7495g);

4)将步骤3)得到的庆大霉素种子培养物置于繁殖罐中进行扩大培养,庆大霉素种子培养物接入量为扩大培养基体积的20%,培养温度为36℃,培养时间为42小时,得到庆大霉素繁殖培养物;

扩大培养基的配方按重量百分比计为:淀粉1.5%,玉米粉1.5%,黄豆饼粉1%,硝酸钾0.05%,蛋白胨0.2%,二氯化钴(CoCl2)0.0005%,余量为水(本方法具体为淀粉1.5g,玉米粉1.5g,黄豆饼粉1.0g,硝酸钾0.05g,蛋白胨0.2g,二氯化钴(CoCl2)0.0005g,水为95.7495g);

5)将步骤4)得到的庆大霉素繁殖培养物置于发酵培养基上进行发酵,庆大霉素繁殖培养物的接入量为发酵培养基体积的20%,发酵温度为34℃,发酵时间为120小时,得到庆大霉素发酵产物;

发酵培养基的配方按重量百分比计为:淀粉4.5%,黄豆饼粉3.5%,玉米粉1.0%,碳酸钙0.7%,蛋白胨0.3%,二氯化钴(CoCl2)0.0015%,硝酸钾0.01%,硫酸铵0.1%,泡敌0.01%,余量为水(本方法具体为淀粉4.5g,黄豆饼粉3.5g,玉米粉1.0g,碳酸钙0.7g,蛋白胨0.3g,二氯化钴(CoCl2)0.0015g,硝酸钾0.01g,硫酸铵0.1g,泡敌0.01g,水为89.8785g);

6)将步骤5)得到的庆大霉素发酵产物进行酸化处理至pH值为2‑3,得到庆大霉素酸化液;酸化处理是以浓度30%的盐酸进行处理,调pH2~3;

7)将步骤6)得到的庆大霉素酸化液进行中和处理,处理后得到pH值为6.8的庆大霉素溶液;中和处理是以浓度40%的氢氧化钠进行处理,调pH6.8;

8)将步骤7)得到的庆大霉素溶液以732树脂进行吸附处理,得到吸附后庆大霉素溶液;吸附处理所用的732树脂为001×7强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂;

9)将步骤8)得到的吸附后庆大霉素溶液上柱去除Ca2+、Mg2+、Cl‑1,得到去除离子的庆大霉素溶液;去除Ca2+、Mg2+、Cl‑1的柱子为Φ1m高2m柱;

10)将步骤9)得到的去除离子的庆大霉素溶液通过饱和树脂后以质量百分含量为4.5%的氨水进行解析,得到庆大霉素解析液;所述饱和树脂是指每毫升树脂吸附了8万单位庆大霉素得到的树脂;

11)将步骤10)得到的庆大霉素解析液以711树脂进行脱色,得到庆大霉素脱色液;脱色处理所用的711树脂为强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂;

12)将步骤11)得到的庆大霉素脱色液以薄膜进行浓缩,得到庆大霉素浓缩液;浓缩量为500L/h,浓缩至原来的1/7;

13)将步骤12)得到的庆大霉素浓缩液加入硫酸后制得硫酸庆大霉素;硫酸的浓度为98%,调至pH5.3;

14)将步骤13)得到硫酸庆大霉素通过喷雾干燥制得硫酸庆大霉素成品,喷雾干燥的条件为进风温度130℃,出风温度85℃,喷速100L/h。

参考文献

[1][中国发明,中国发明授权]CN201310099477.5硫酸庆大霉素的制备方法

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