背景[1-3]
吕氏碱性美蓝染色液是一种常用于微生物学实验室的染色剂，主要用于酵母菌等微生物的镜检染色。
吕氏碱性美蓝染色液的主要成分是美蓝（Methylene Blue），也称为亚甲基蓝或次甲基蓝。美蓝是一种氧化还原指示剂，它的氧化型为蓝色，而在活细胞内由于新陈代谢作用，美蓝会被还原成无色的还原型。因此，当使用吕氏碱性美蓝染色液对微生物进行染色时，活细胞由于具有较强的还原能力而呈现无色，而死细胞或衰老的细胞由于还原能力弱或消失，会被染成蓝色或淡蓝色。
在使用吕氏碱性美蓝染色液进行染色时，通常需要将涂片在火焰上固定，然后滴加染液，染色1至3分钟，之后水洗并待干后进行镜检。染色结果中，活细胞应为无色，死细胞或受损细胞则会显现出蓝色或浅蓝色。
吕氏碱性美蓝染色液
吕氏碱性美蓝染色液（0.1%）主要由美蓝、酒精、氢氧化钾等组成，其中美蓝的终浓度为0.1%。这种染色液在科研领域具有广泛的应用，尤其在酵母菌的染色观察中，不仅可以观察酵母菌的形态，还可以区分活细胞和死细胞。其原理在于活细胞具有新陈代谢作用，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此活细胞内的美蓝呈无色；而死细胞或衰老的细胞还原能力弱或消失，被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
此外，吕氏碱性美蓝染色液还可以用于多种组织切片、涂片染色。然而，由于该染色液易于氧化，其染色结果不宜长久保存。因此，它主要用于科研目的，不适用于临床诊断或其他用途。
在使用吕氏碱性美蓝染色液时，必须遵循正确的操作步骤，注意避免剧烈涂抹以免破坏细胞，并确保染液量适中。同时，由于该染色液可能含有对光线敏感、容易分解的成分，应保存在棕色容器中，并置于室温下避光保存，以保证其稳定性和有效性。
吕氏碱性美蓝染色液为科研用试剂，对人体可能具有一定的毒性，因此应避免皮肤直接接触溶液，以防有毒物质造成身体伤害。如需了解更多关于吕氏碱性美蓝染色液的信息，建议查阅相关科研文献或咨询专业科研人员。
应用[4][5]
吕氏碱性美蓝染色液可以用于鸡沙氏住白细胞虫体染色技术的优化
对鸡沙氏住白细胞虫病的流行病学、病原学、血液生化学等方面进行深入研究,并对不同动物模型感染性进行了初步构建,以期为沙氏住白细胞虫的进一步研究提供科学依据。
方法1.在鸡沙氏住白细胞虫配子体染色方面,采用12种不同染色方法:革兰氏染色法、吕氏碱性美蓝染色液美蓝染色法、抗酸染色法、瑞特氏染色法、姬姆萨染色法、复红染色法、阿伯特染色法、瑞—姬混合染色法、立克次氏体染色法、梅古氏染色法、梅—姬染色法、伊红—亚甲基兰染色法对鸡沙氏住白细胞虫配子体染色,并比较染色结果。2.在流行病学调查方面,通过血液涂片染色对湘西自治州鸡沙氏住白细胞虫感染情况,与鸡品种、年龄、饲养管理情况进行了深入研究;并对传播媒介-蚋采用昆虫网进行捕捉、辨种,进行初步研究。3.在不同动物模型探讨方面,采集患病鸡只血液按照不同感染方式(腹腔接种、静脉接种、皮下接种、混合接种)接种雏鸡、雏鸭,观察鸡沙氏住白细胞虫首现期、高峰期、消退起情况,高峰期配子体数目及雌雄配子体比例,配子体在外周血液中昼夜变化。4.在动物感染后生化指标的测定方面,对雏鸡、雏鸭进行每周体重测量,外周血液学指标测定:感染后70天血清生化指标测定、脏器重量的测量、临床病理学检查。
结果1.瑞—姬混合染色法、梅—姬染色法、伊红—亚甲基兰染色法效果最好;其次为革兰氏染色法、吕氏碱性美蓝染色液美蓝染色法、瑞特氏染色法、姬姆萨染色法、梅古氏染色法、立克次氏体染色法等染色方法;抗酸染色法、复红染色法、阿伯特染色法染色效果较差。吕氏碱性美蓝染色液美蓝染色法由于其染色时间短、操作简单、层次对比明显、结构完整性好,虽然高倍镜下清晰度不高,但低倍镜下检出率高。瑞—姬混合染色法、梅—姬染色法、伊红—亚甲基兰染色法为复染色法,虽然染色时间长,但层次对比明显、结构最完整、最清晰。
参考文献
[1]Immunogenicity of Leucocytozoon caulleryi sporozoites and their reactivity with specific immune sera[J].T.Morii;;T.Matsui;;T.Fujino;;F.Kobayashi;;T.Tsuji.Parasitology Research,1996(5)
[2]Protection against Chicken Leucocytozoonosis Provided by Immunization with Spleen Homogenate Infected with Leucocytozoon caulleryi[J]..Avian Diseases,1991(3)
[3]HEMATOZOA OF WILD TURKEYS FROM THE MIDWESTERN UNITED STATES:TRANSLOCATION OF WILD TURKEYS AND ITS POTENTIAL ROLE IN THE INTRODUCTION OF PLASMODIUM KEMPI[J].Marc D.Castle;;Bruce M.Christensen.Journal of Wildlife Diseases,1990(2)
[4]Protective immunity to Leucocytozoon caulleryi in chickens by a killed vaccine[J].T.Morii;;J.Fujita;;K.Akiba;;T.Isobe;;K.Nakamoto;;Masubuchi;;H.Ishihara.Parasitology Research,1990(7)
[5]奉佳.鸡沙氏住白细胞虫体染色技术的优化[D].湖南农业大学,2009.