DC细胞体外快速成熟试剂盒

2020/2/21 8:02:26

背景及概述[1]

DC细胞体外快速成熟试剂盒又叫树突状细胞快速成熟试剂盒,通用名称:成熟树突状细胞体外处理试剂盒,专门从人类骨髓、脐带血或外周血中得到的未成熟树突状细胞,进行体外诱导和负载,处理得到成熟树突状细胞。主要组成成份是氨基酸、维生素、细胞因子和糖类等。

试剂盒成份[1]

操作方法[1]

DC-I用150μL PBS溶解; DC-II用20μL PBS溶解; DC-III用10μL PBS溶解; DC-IV用50μL PBS溶解; DC-V用1mL PBS溶解。可将上述因子配制后置于-20°C冰箱保存,但建议现配现用。

1、D0 取250M个PBMC细胞,用50ml 1640培养液重悬,铺于T-175培养瓶中,置于37℃、 5%CO2培养箱孵育2h;

2、 孵育2h后,轻晃T-175培养瓶,去悬浮细胞,用20mL的1640培养液洗涤两次,分别加入DC培养基100 mL,4.6μLDC-I溶液(至其终浓度为500IU/mL)以及4μL DC-II溶液(至其终浓度为10ng/mL),同时加入5%的FBS,继续置于37℃、5%CO2培养箱培养;

3、 如需加入特异性抗原,可以于D2加入相应的特异性抗原(终浓度20-80μg/mL);

4、 D2 分别加入5μL DC-III溶液(至其终浓度为10ng/mL),5μL DC-IV溶液(至其终浓度为500IU/mL),以及100μL DC-V溶液(至其终浓度为1μg/mL);

5、 D3 收集DC细胞于50mL离心管中用PBS离心洗涤3次,收获DC细胞。

注意: 若初始的PBMC使用量非操作说明中250M的数量,请根据实际PBMC数量对试剂盒中各试剂的量做相应调整。

产品保存[1]

1、 本产品需避光保存;

2、 DC培养基, DC-I与DC-IV置于2-8°C保存; DC-II, DC-III与DC-V置于-20°C保存;

3、 请于保质期内使用本产品,超过保质期,请勿使用。

质量控制[1]

本产品已使用人PBMC进行培养性能的测试,确保本产品具有使DC细胞快速成熟的能力。此外,还进行如下指标的检测,以确保质量:无菌检测(包括细菌,真菌)、pH 测试、支原体检测、内毒素检。

主要参考资料

[1] DC细胞体外快速成熟试剂盒说明书

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