背景[1-3]
大鼠生长激素(GH)Elisa试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠生长激素（GH）水平。用纯化的大鼠抗生长激素（GH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入生长激素（GH），再与HRP标记的生长激素（GH）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的生长激素（GH）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠生长激素（GH）浓度。
大鼠生长激素(GH)Elisa试剂盒
样本处理及要求：
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
大鼠生长激素(GH)Elisa试剂盒操作程序：
1.预先计算好所需的板条数，实验前30 min，拿出试剂盒，恢复至室温。
2.每个反应孔中加入100μl标准品工作液或检测样本（若样本浓度高于检测范围，需用标准品&样本稀释液稀释后取样），标准品需做复孔，封板后于37°C孵箱孵育90 min。
3.弃去液体，甩干，每个反应孔中加入100μl生物素标记瘦素抗体工作液至反应孔中，封板后于37°C孵箱孵育60 min。
4.洗涤：弃去液体，甩干，每个反应孔中加入350μl洗涤液，浸泡1-2 min，甩干洗涤液。重复4次。
5.每个反应孔中加入100μl HRP标记链霉亲和素工作液至反应孔中，封板后于37°C孵箱孵育30min。
6.洗涤：每个反应孔中加入300μl洗涤液，间隔30 s，甩干洗涤液。重复4次。
7.每个反应孔中加入90μl显色剂（避光）至反应孔中，封板后于37°C避光显色15 min左右。
8.每个反应孔中加入50μl终止液，即刻用酶标仪450 nm波长下测量OD值（5 min内）。
9.用酶标仪450 nm波长测定OD值。
10.计算标准品、样品的平均OD值：每个标准品和样本的OD值应减去零孔的OD值。
11.以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用“四参数logistics模型”绘制标准曲线。
12.若样本OD值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。
应用[4][5]
大鼠生长激素(GH)Elisa试剂盒可以用于HS3ST2在大鼠GH垂体腺瘤细胞中的作用研究
通过构建鼠源的敲低HS3ST2基因的短发夹RNA(shRNA),分别转染入大鼠生长激素型垂体腺瘤GH3细胞系,进一步通过细胞实验深入研究基因HS3ST2在GH腺瘤中的作用,探索该基因对GH腺瘤生长增殖、凋亡及激素分泌过程中的影响。
方法:该实验构建了鼠源的敲低HS3ST2基因的短发夹RNA(shRNA),分别转染入大鼠生长激素型垂体腺瘤GH3细胞系,通过RT-qPCR测量转染前后HS3ST2基因在GH3细胞中的表达水平。采用cck-8法分别测定转染24h、48h、72h及96h后各组GH3细胞活力。在转染72 h后,用大鼠生长激素(GH)Elisa试剂盒检测各组GH3细胞上清中GH和IGF-1的分泌水平。通过细胞流式检测转染72h后,各组GH3细胞凋亡的相对水平。
大鼠生长激素(GH)Elisa试剂盒结果:GH3细胞中HS3ST2的表达降低时,该细胞的增殖活性降低(P<0.05),GH3细胞分泌GH(P<0.05)和IGF-1(P<0.05)也均有所降低,而细胞凋亡比例有所增高但不明显,在细胞凋亡的晚期,细胞凋亡的比例增高相对早期更加明显。结论:基因HS3ST2可能促进GH垂体腺瘤的发生和发展,并延缓或减少肿瘤细胞的凋亡,其主要作用节点可能在细胞的晚期凋亡阶段。本研究仅仅通过体外实验证实HS3ST2基因对GH3细胞的一些影响,需要我们进一步探索研究其作用通路的影响,以及通过动物实验研究HS3ST2基因在GH腺瘤中的作用,来说明该基因是GH垂体腺瘤发生和发展的关键基因。
参考文献
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[2]Heparan sulfate 3-O-sulfotransferase 2(HS3ST2)displays an unexpected subcellular localization in the plasma membrane[J].Maxime Delos;;François Foulquier;;Charles Hellec;;Dorothée Vicogne;;Alexandre Fifre;;Mathieu Carpentier;;Dulce Papy-Garcia;;Fabrice Allain;;Agnès Denys.BBA-General Subjects.2018
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[5]白崧.HS3ST2在大鼠GH垂体腺瘤细胞中的作用研究[D].蚌埠医学院,2020.