背景[1-3]
人白细胞介素19酶联免疫试剂盒用于测定血清，血浆及相关液体样本中人白细胞介素19的含量。
白细胞介素19(IL-19)属于含有病毒和细胞同源蛋白的II类α-螺旋细胞因子的IL-10家族。成熟的人IL-19分子量35-40 kDa含有N-糖基化的分泌型单体,其与小鼠和大鼠IL-19有69%的氨基酸序列同源性。尽管IL-19主要在单核细胞中表达,但在炎症刺激作用下,它在单核细胞以及角质形成细胞,平滑肌细胞和气道上皮细胞中的表达水平都会上升。
IL-19可诱导单核细胞,树突细胞,肺上皮细胞,肝细胞或CD8+T细胞释放炎性介质和KGF,促进T辅助细胞向Th2应答分化,诱导IL-10和自身IL-19的产生。在感染性休克小鼠模型中,IL-19可促进中性粒细胞浸润和组织损伤,IL-19也可以在球囊血管成形术后发挥保护作用。虽然IL-19主要在炎症部位产生,但在包括哮喘中的气道上皮细胞,牛皮癣中的基底和基底上角质形成细胞也会产生IL-19,在哮喘,尿毒症和感染性休克患者血清中IL-19表达水平也会升高。
人白细胞介素19酶联免疫试剂盒的检测原理
人白细胞介素19酶联免疫试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-19的浓度。IL-19捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标本或参考品时,其中的IL-19会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人IL-19抗体后,抗人IL-19抗体与IL-19接合,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来;其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。加入显色剂,若样本中存在IL-19将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,IL-19浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中IL-19浓度。
人白细胞介素19酶联免疫试剂盒
人白细胞介素19酶联免疫试剂盒使用前准备
1）标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2）洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
人白细胞介素19酶联免疫试剂盒操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
人白细胞介素19酶联免疫试剂盒可以用于探讨血清白细胞介素19与糖尿病肾病患者颈动脉硬化的关系
探讨血清白细胞介素19(Interleukin-19,IL-19)与糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)患者颈动脉硬化的相关关系。
方法:收集2018年1月-2018年4月在青岛市市立医院住院治疗的糖尿病肾病的患者120例,根据尿白蛋白/肌酐比值(Urinary albumin/creation ratio,ACR)将患者分为微量蛋白尿肾病组和大量蛋白尿肾病组,组内再次分为两个亚组:伴有颈动脉硬化者和无颈动脉硬化者。同时选取健康体检者30例,收集患者基本情况,血生化检测糖化血红蛋白(HbA1c)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)等相关指标,采用人白细胞介素19酶联免疫试剂盒测定血清IL-19浓度,应用多普勒彩色超声检查颈动脉硬化的情况,应用t检验和方差分析的统计学方法,分析IL-19浓度在各组间的统计学差异,采用Pearson相关分析,以观察IL-19与各指标的相关性。
结果:共120例糖尿病肾病患者被纳入研究,平均年龄为(63.56±9.33)岁,大量蛋白尿肾病组与微量蛋白尿肾病组患者分别为61例和59例,颈动脉硬化发生率分别为62.3%和42.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。大量蛋白尿肾病组和微量蛋白尿肾病组IL-19水平高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);人白细胞介素19酶联免疫试剂盒结果显示大量蛋白尿肾病组IL-19水平明显高于微量蛋白尿肾病组和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);在大量蛋白尿肾病组中,有颈动脉硬化者IL-19水平高于无颈动脉硬化者,在微量蛋白尿肾病组中也可观察到同样的结果,差异均具有统计学意义(P<0.05)。另外Pearson相关结果显示,患者IL-19水平与HbA1c、CRP、葡萄糖、LDL、TC呈正相关(r值分别为0.255,0.515,0.224,0.067,0.135,P<0.05),与TG、HDL无明显相关。
参考文献
[1]Induction of MiR133a expression by IL-19 targets LDLRAP1 and reduces oxLDL uptake in VSMC[J].Khatuna Gabunia;;Allison B.Herman;;Mitali Ray;;Sheri E.Kelemen;;Ross N.England;;Raul DeLa Cadena;;William J.Foster;;Katherine J.Elliott;;Satoru Eguchi;;Michael V.Autieri.Journal of Molecular and Cellular Cardiology.2017
[2]Interleukin-19 alleviates brain injury by anti-inflammatory effects in a mice model of focal cerebral ischemia[J].Weiying Xie;;Lili Fang;;Shuyuan Gan;;Haojun Xuan.Brain Research.2016
[3]The role of IL-18 in type 1 diabetic nephropathy:The problem and future treatment[J].Nehal M.Elsherbiny;;Mohammed M.H.Al-Gayyar.Cytokine.2016
[4]IL-19 Halts Progression of Atherosclerotic Plaque,Polarizes,and Increases Cholesterol Uptake and Efflux in Macrophages[J].Khatuna Gabunia;;Stephen Ellison;;Sheri Kelemen;;Farah Kako;;William D.Cornwell;;Thomas J.Rogers;;Prasun K.Datta;;Mireille Ouimet;;Kathryn J.Moore;;Michael V.Autieri.The American Journal of Pathology.2016
[5]王俊楠.探讨血清白细胞介素19与糖尿病肾病患者颈动脉硬化的关系[D].青岛大学,2019.