狂犬病毒RV核酸检测试剂盒荧光-PCR法的应用

2025/8/18 9:39:03 作者:云霄

背景[1-3]

狂犬病毒(RV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)适用于检测的犬脑组织、唾液等标本中狂犬病毒RNA,适用于狂犬病毒感染的辅助诊断。

狂犬病是由狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)引起的一种急性、接触性人兽共患传染病。病原为弹状病毒科狂犬病毒属RNA病毒。该病主要是通过被患病或带毒的动物咬伤传染所致,其病死率高达100%。

狂犬病毒(RV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法).png

狂犬病毒(RV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)

检验原理

狂犬病毒(RV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)根据狂犬病毒基因组设计特异性引物和荧光探针[1-2],用一步法荧光RT-PCR技术对狂犬病毒RNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

标本采集

对大动物(如犬、猫、牛等)脑组织标本的采集使用快速采样法,即用塑料管从头部枕骨大孔或能看见脑组织的位置向眼眶处斜插(或用粗穿刺针从眼角眶向头部枕骨大孔处斜插),然后阻断塑料管尾部与外界大气压强连通,迅速将塑料管拔出。尽量使塑料管通过大脑、中脑和小脑部位。取出的塑料管中应有脑组织;将脑组织标本放入无菌离心管中。

唾液:用唾液采集器或棉拭子收集唾液于无菌离心管中。

应用[4][5]

狂犬病毒(RV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)可以用于新疆狂犬病病毒流行病学调查及基因组和N-G蛋白预测分析

研究以新疆阿勒泰地区疑似狂犬病的3份羊脑组织与温宿、察布查尔县、吉木乃县、哈巴河县四个地区各兽医站送检49份犬脑组织为实验材料,以直接免疫荧光检测(DFA)、狂犬病毒(RV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)扩增狂犬病病毒(RV)特异性目的基因(N基因)和XJALT-2012-1毒株全基因组序列测定进行病毒检测。以DNAStar-Lasergene.v7.1软件拼接所测定的序列,应用BLAST软件分析N基因的遗传进化关系。

结果显示本研究检测结果为狂犬病毒阳性且获得了该XJALT-2012-1毒株全基因序列。新疆XJALT-2012-1毒株基因组序列全长11923bp,与GenBank公布的其它RV基因组构成基本一致。全基因组主要结构蛋白的编码顺序及大小为:3'-N(1353bp)-P(894bp)-M(609bp)-G(1575bp)-L(6387bp)-5'。在结构蛋白基因之间的间隔区大小各为N-P为2bp、P-M为5bp、M-G为5bp、G-L为423bp。通过XJALT-2012-1毒株的5个基因遗传进化树、5个基因及其氨基酸序列的变异频率图和5个氨基酸序列的疏水性分析。表明该XJALT-2012-1毒株与狂犬病病毒基因Ⅰ型俄罗斯C群的遗传关系最近,属于同一进化分支。应用分子生物信息学软件BioEdit对XJALT-2012-1毒株的核(N)蛋白与糖(G)蛋白氨基酸序列B细胞抗原表位的优势区域预测。结果表明:羊RV的G蛋白氨基酸第200、203、204变异位点与狂犬病病毒的毒力相关;核(N)蛋白氨基酸序列的430-437与糖(G)蛋白序列的130-138、191-201、505-520区域及其附近最有可能是B淋巴细胞抗原表位的优势区域。

参考文献

[1]Phylogenetic analysis of nucleoprotein gene of dog rabies virus isolates from Southern India[J].T.Nagarajan;;S.B.Nagendrakumar;;B.Mohanasubramanian;;S.Rajalakshmi;;N.R.Hanumantha;;R.Ramya;;D.Thiagarajan;;V.A.Srinivasan.Infection,Genetics and Evolution,2009(5)

[2]Molecular characterization of Rabies Virus isolates from dogs and crab-eating foxes in Northeastern Brazil[J]..Virus Research,2009(1)

[3]A retrospective study of rabies in humans in Zimbabwe,between 1992 and 2003[J].D.M.Pfukenyi;;D.Pawandiwa;;P.V.Makaya;;Unesu Ushewokunze-Obatolu.Acta Tropica,2007(3)

[4]Molecular epidemiology of rabies in Colombia 1994–2005 based on partial nucleoprotein gene sequences[J].Andrés Páez;;Andrés Velasco-Villa;;Gloria Rey;;Charles E.Rupprecht.Virus Research,2007(1)

[5]陈继章.新疆狂犬病病毒流行病学调查及基因组和N-G蛋白预测分析[D].新疆农业大学,2014.

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