背景[1-3]
汉坦病毒2型(HTV-2)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)适用于检测病患血液、尿液及病变组织中的汉坦病毒RNA，适用于汉坦病毒感染的辅助诊断。
汉坦病毒2型(HTV-2)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)用一对汉坦病毒2型特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对汉坦病毒2型RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
汉坦病毒2型(HTV-2)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)
适用仪器：ABI7500、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
标本采集：抽取全血5mL至EDTA-2Na抗凝管，或采集患者尿液、病变组织。
保存和运输：采集或处理好的样品在2℃~8℃条件下保存应不超过24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过3次。
汉坦病毒2型(HTV-2)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)使用方法：
1.样品处理（样本处理区）
1.1样本前处理血液：直接取100μL于灭菌离心管中或取血清100ul于灭菌离心管中尿液：取100μL于灭菌离心管中；组织样品：称取组织样品约0.5g，置于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，匀浆后取100μL于1.5mL灭菌离心管中；
1.2核酸提取推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的核酸提取试剂（离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。
2.试剂配制（试剂准备区）根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；反应管数每满10份，多配制1份)。将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中，20μL/管。
3.加样（样本处理区）将步骤1提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4.PCR扩增（核酸扩增区）
4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；
4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；荧光通道选择：检测通道（Reporter Dye）FAM，淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光，选择None即可。
4.3按照说明书设置循环参数
5.结果分析判定
5.1结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析ABI7500仪器为例）反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以及Threshold值（用户可根据实际情况自行调整，Start值可设在3～15、End值可设在5～20，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击Analyze自动获得分析结果。
5.2结果判断阳性：检测通道Ct值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线；阴性：样本检测结果Ct值>40或无Ct值。
5.3质控标准阴性质控品：无特异性扩增曲线或无Ct值显示；阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且Ct值≤32；以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
应用[4][5]
汉坦病毒2型(HTV-2)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)可以用于汉坦病毒宿主动物不同组织病原分布及遗传特征研究
收集河北省2022～2023年春、秋季肾综合征出血热（HFRS）宿主动物不同组织样本,对其进行汉坦病毒（HV）检测,并对核酸检测阳性样本进行基因序列测定,通过分析其不同组织病原分布情况及遗传特征,结合鼠密度、鼠带毒率监测情况,为HFRS的精准防控提供科学依据。
方法:1.根据河北省HFRS的流行强度和地区分布情况,在冀北、冀南、冀中、冀东四个地区共选取8个区县为研究区域,2022～2023年春、秋两季分别在研究区域的居民区和野外采用夹夜法捕鼠,进行鼠种鉴定后,分析其鼠密度情况。2.现场解剖,无菌采集宿主动物组织样本,低温运至实验室,对脏器（鼠肺、肝、肾、心、脾等）研磨离心处理后,提取总RNA进行核酸检测,依据汉坦病毒2型(HTV-2)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)检测结果进行鼠带毒率监测,比较阳性样本在不同组织间HV分布是否存在差异。3.筛选阳性样本做进一步全基因序列测定,利用DNASTAR 7.1软件包进行核苷酸和氨基酸同源性分析,用MEGA 11构建系统发育树,分析其遗传特征。4.对无菌采集的鼠血样本进行总抗体检测,与汉坦病毒2型(HTV-2)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)检测结果进行对比,比较两种方法的HV检出情况。
参考文献
[1]Hantavirus in humans:a review of clinical aspects and management.[J].Vial Pablo A;Ferrés Marcela;Vial Cecilia;Klingström Jonas;Ahlm Clas;López René;Le Corre Nicole;Mertz Gregory J.The Lancet.Infectious diseases.2023
[2]A Brief History of Bunyaviral Family Hantaviridae[J].Kuhn Jens H.;Schmaljohn Connie S..Diseases.2023
[3]Endangered liana of the western ghats,Coscinium fenestratum(gaertn.)colebr:An overview[J].
[4]Detection and Genetic Characterization of Seoul Virus in Liver Tissue Samples From Rattus norvegicus and Rattus tanezumi in Urban Areas of Southern China[J].He Wenqiao;Fu Jiaqi;Wen Yuqi;Cheng Mingji;Mo Yun;Chen Qing.Frontiers in Veterinary Science.2021
[5]史晓董.汉坦病毒宿主动物不同组织病原分布及遗传特征研究[D].河北医科大学,2024.