背景[1-3]
猪链球菌通用型(SS-U)核酸试剂盒(荧光-PCR法)用于检测猪链球菌通用型(SS-U)的DNA，用于猪链球菌通用型(SS-U)感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。本产品不提供活体样品做阳性对照，仅提供人工合成的特异性RNA片段标准品作为阳性对照，仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗用途。
猪链球菌通用型(SS-U)核酸试剂盒(荧光-PCR法)
猪链球菌通用型(SS-U)核酸试剂盒(荧光-PCR法)技术原理：
采用SYBR Green一步法荧光定量PCR技术，结合特异性扩增引物对目的基因进行体外扩增，本试剂盒具有灵敏性高、特异性强、反应时间短等优点，操作简便，污染概率低等特点。
产品特点
特异性好：采用SYBR Green荧光染料法进行扩增。
灵敏度高：检测灵敏度可达500copies/uL以下。
操作简便：采用一步法荧光定量PCR进行扩增，逆转录步骤与PCR扩增在一管反应液中完成。
适用仪器
ABI、安捷伦、Roche、博日，天隆，宏石，鲲鹏等荧光定量PCR仪。
自备：无DNA/RNA酶的1.5mL离心管，0.2mL PCR反应管，滤芯吸头(规格:10μL，200μL，1000μL)，离心机，振荡混合器，各种规格的移液器。
猪链球菌通用型(SS-U)核酸试剂盒(荧光-PCR法)操作步骤:
1.样品处理（样本处理区）
1.1样本前处理
1.2DNA提取
2.试剂配制（试剂准备区）
3.加样（样本处理区）
4.PCR扩增（核酸扩增区）
5.结果分析判定
6.质控标准
阴性质控品：无明显扩增曲线或无Ct值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤30；
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7.产品性能指标
阴阳性参考品符合率：5份阳性参考品符合率为100％；10份阴性参考品符合率为100％。
最低检测限：检测灵敏度可达500copies/uL以下。
精密度：批内、批间精密度检测Ct值的变异系数（CV）均小于等于3%。
应用[4][5]
猪链球菌通用型(SS-U)核酸试剂盒(荧光-PCR法)可以用于华中及周边地区猪链球菌病流行病学调查与分析及猪链球菌2、7、9型荧光定量PCR分型方法的建立
研究猪链球菌病的病原和流行状况,疾病的发病、流行及耐药规律是疫苗研制和对症治疗的重要基础。
1. 猪链球菌2、7、9型荧光定量PCR分型方法的建立基于cps基因簇中血清型特异性基因及猪链球菌通用型(SS-U)核酸试剂盒(荧光-PCR法),本研究建立了猪链球菌2型、7型、9型三重荧光定量PCR分型方法,该方法最低检出限为2.62 copies/μL-26.2copies/μL,灵敏性较好;无血清型交叉反应,特异性较好;3次重复检测结果均一致,重复性较好;与商品化试剂盒的符合率为100%。
2. 猪链球菌分离株的鉴定、血清型及MLST分型本研究从华中及周边地区(湖北省、河南省、安徽省)多个规模化猪场共分离到猪链球菌125株,检出率分别为28.7%(98/341)、22.9%(8/35)和55.9%(19/34);采用猪链球菌通用型(SS-U)核酸试剂盒(荧光-PCR法)进行了血清型分型,共鉴定血清型16种,主要为2型、3型、9型和7型等;通过MLST方法分析了遗传多样性,共鉴定STs 31种,主要是T7、ST117、ST243等,其中17种STs为首次发现,主要属于ST2600-ST2616;利用e BURST软件进行了MLST CC分型,共确定CC 5种(CC1、CC28、CC54、CC94、CC725),无法确定型(NF)3株。
3.猪链球菌分离株血清型、MLST分型和致病型的相关性分析采用比例法和OR法分析猪链球菌分离株血清型、STs型、致病型之间关系,结果显示,80%-100%被归类为致病性菌株的为血清2型、4型、14型、15型和16型,被归类为可能致病性菌株的为血清7型、9型、10型、25型和28型,被归类为共生性菌株的为血清13型和18型。60%以上被归类为致病性菌株的STs和NF类别有8种,即ST1、ST7、ST94、ST353等;80%以上被归类为可能致病性菌株的STs类别有14种,即ST243、ST1175、ST2056、ST2345、ST2366等;被归类为共生性菌株的STs类别有3种,即ST1290、ST2615和ST2616。4.猪链球菌分离株的耐药性分析使用肉汤微量稀释法测定了猪链球菌分离株的13种抗生素的MIC值。结果表明,耐药率最高是克林霉素,达99.2%;其次是四环素,为96%;红霉素耐药率为80%。多重耐药(三重及三重以上)菌株(MDR)达87.2%。通过猪链球菌通用型(SS-U)核酸试剂盒(荧光-PCR法)对耐药基因进行了扩增,结果表明,大环内酯类耐药基因检出率较高,其次是四环素类。
参考文献
[1]Streptococcus suis Research Update:Serotype Prevalence and Antimicrobial Resistance Distribution in Swine Isolates Recovered in Spain from 2020 to 2022[J].Máximo Petrocchi Rilo;César Bernardo Gutiérrez Martín;Vanessa Acebes Fernández;álvaro Aguarón Turrientes;Alba González Fernández;Rubén Miguélez Pérez;Sonia Martínez Martínez.Veterinary Sciences.2024
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[3]Isolation,Identification and Drug Resistance Rates of Bacteria from Pigs in Zhejiang and Surrounding Areas during 2019–2021[J].Xiangfei Xu;Junxing Li;Pan Huang;Xuemei Cui;Xuefeng Li;Jiaying Sun;Yee Huang;Quanan Ji;Qiang Wei;Guolian Bao;Yan Liu.Veterinary Sciences.2023
[4]Antimicrobial susceptibility among respiratory tract pathogens isolated from diseased cattle and pigs from different parts of Europe.[J].de Jong Anno;Morrissey Ian;Rose Markus;Temmerman Robin;Klein Ulrich;Simjee Shabbir;Garch Farid El.Journal of applied microbiology.2023
[5]李晓月.华中及周边地区猪链球菌病流行病学调查与分析及猪链球菌2、7、9型荧光定量PCR分型方法的建立[D].华中农业大学,2024.