背景[1-4]
猪水疱性口炎(VSV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)利用实时荧光PCR原理，检测水疱性口炎病毒，对动物水疱性口炎病诊断有重要指导意义。
猪水疱性口炎(Vesicular stomatitis,VS)一种在自然界中会引发牛、马、羊、猪等动物口腔粘膜、蹄部水疱性病灶的家畜病原体,其引起的大流行会给畜牧业带来重大经济损失。 该病传播迅速,临床症状与口蹄疫相似,感动染动物由于生产能力下降而造成严重经济损失，一旦发生将给动物和食品贸易带来巨大影响。国际动物卫生组织(OIE)把VS列为A类动物疫病。VS主要发生在美洲,法国和南非曾有该病的报道。我国湖北省曾于20世纪90年代发生猪的VS。我国与国外的动物及动物产品贸易增长迅速,VS传播的风险不可忽视，建立可靠的检测技术对严防该病的传播意义重大。
猪水疱性口炎(VSV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)
产品特点：
一、严格的质控体系
所有试剂盒从原料到成品都经过严格的质量控制，确保每一盒试剂盒都具有稳定可靠的质量，检测结果更可信。
二、高灵敏度
产品经过不断优化，具有出色的灵敏度，能够检测到极微量的猪水疱性口炎核酸，不放过任何潜在的感染风险。
三、便捷操作
综合各项指标特性，研发出操作便捷的试剂盒。从样本制备到结果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能轻松上手。
四、多样的检测验证样本
该试剂盒经过多种样本的检测验证，适用于水泡皮及水泡液等多种常见样本，满足不同的检测需求。
适用仪器
ABI7500、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
标本采集
病死或扑杀动物，取水泡皮及水泡液；待检活动物，取O/P液2~3mL。
保存和运输
采集或处理好的样品在2℃~8℃条件下保存应不超过24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过3次。
操作步骤
1.样品处理（样本处理区）
1.1样本前处理
1.2DNA提取
2.试剂配制（试剂准备区）
3.加样（样本处理区）
4.PCR扩增（核酸扩增区）
5.结果分析判定
实验结果：
6.质控标准
阴性质控品：无明显扩增曲线或无Ct值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤30；
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7.产品性能指标
阴阳性参考品符合率：5份阳性参考品符合率为100％；10份阴性参考品符合率为100％。
最低检测限：检测灵敏度可达300copies/uL以下。
精密度：批内、批间精密度检测Ct值的变异系数（CV）均小于等于5%。
应用[5]
猪水疱性口炎(VSV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)可以用于猪A型塞内卡病毒分离鉴定及ICR小鼠感染试验研究
A型塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）是小RNA病毒科,塞内卡病毒属成员。SVA临床症状主要以腹泻、鼻及蹄部囊泡、糜烂等症状为特征,与口蹄疫病毒（FMDV）、水疱性口炎病毒（VSV）、猪传染性水疱病毒（SVDV）及猪水疱性皮疹病毒（VESV）引起的症状难以区分。
试验从发生水疱性疾病的猪的水疱液中分离鉴定了SVA毒株,并对ICR小鼠进行感染试验。2017年,南方某猪场发生不明病原引起的水疱性疾病,该场猪均接种过FMDV疫苗。通过猪水疱性口炎(VSV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)检测,确定引起该场水疱性疾病的病原为SVA。通过BHK21细胞分离2株病毒,并通过RT-PCR、间接免疫荧光试验、电镜观察进行鉴定,将分离鉴定的2株病毒分别命名为CH/FuJ/2017与CH/FuJ1/2017,并对其进行测序和分析;
猪水疱性口炎(VSV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)结果表明,CH/FuJ/2017与CH/FuJ1/2017之间核苷酸序列同源性为99.7%,与国内参考株核苷酸序列同源性在96.1%98.0%,与SVV-001株核苷酸序列同源性为93.9%,与国外参考株之间核苷酸序列同源性为93.9%98.5%。CH/FuJ/2017与CH/FuJ1/2017之间VP1基因核苷酸序列同源性为99.4%,与国内参考株VP1基因核苷酸序列同源性在95.1%97.6%;与SVV-001株VP1基因核苷酸序列同源性为91.3%,与国外参考株之间VP1基因核苷酸序列同源性为91.3%98.2%,通过与SVV-001 VP1基因氨基酸序列进行比对分析,结果显示,本试验所分离的2株存在6个氨基酸突变位点。遗传进化分析结果显示,本试验分离的CH/FuJ/2017、CH/FuJ12017处于一个小分支上,国内部分SVA毒株与美国分离株亲缘关系较近,有些独自处于一个分支且与其他国内分离株亲缘关系较近;美国、加拿大、泰国、巴西分离株均处于不同分支。将CH/FuJ/2017接种30日龄仔猪进行动物回归试验,结果显示该病毒株在断奶仔猪上具有致病性。为了研究SVA在感染动物体内的组织分布及各组织的病毒载量,基于猪水疱性口炎(VSV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)建立TaqMan荧光定量PCR方法,试验结果显示,所建立的TaqMan荧光定量PCR方法在3.75×10～03.75×10～8拷贝标准品范围内具有良好的线性相关性（线性回归方程为Y=-3.1013X+34.60）,具有良好的重复性、特异性、敏感性,其最低检出限为3.75拷贝,较普通PCR更为灵敏。本试验分离鉴定2株SVA毒株,同时建立TaqMan荧光定量PCR方法,对ICR小鼠进行感染试验,并对体液免疫及细胞免疫进行初步评价。本研究为SVA引起猪水疱性疾病提供技术支持,为防制SVA引起水疱性疾病的疫苗的开发提供物质基础,为SVA发病机理研究、SVA疫苗免疫效果评估的动物模型的建立奠定理论依据。
参考文献
[1]陈鸿洲.可多点插入外源基因的水疱性口炎病毒（VSV）载体的构建[D].广州医科大学,2024.
[2]花群义,徐自忠,杨云庆,等.TaqMan RT-PCR对水疱性口炎病毒的鉴定检测[J].动物医学进展, 2004.
[3]水疱性口炎．中国百科．2022-05-25.
[4]陈爽.宿主因子IFI44和IFI35对水疱性口炎病毒复制的影响[D].吉林大学,2021.
[5]李秀博.猪A型塞内卡病毒分离鉴定及ICR小鼠感染试验研究[D].黑龙江八一农垦大学,2019.