趋化因子是一种小肝素结合蛋白，分子量为7～13 kD，在氨基酸序列上具有20%～70%的同源性，具有趋化介质和细胞因子的双重功能。趋化因子根据前2个半胱氨酸残基在整体蛋白的氨基酸序列中的位置被划分为CC类（不插入其他氨基酸残基）、CXC类（插入1个氨基酸残基）、CX3C类（插入3个其他氨基酸）和C类（N端仅1个C）4个亚家族员。趋化因子可参与器官纤维化、肿瘤生长等多种病理生理过程，在炎症、感染、纤维形成、癌症及代谢相关性疾病中均发挥作用[1]。
CC趋化因子受体4（CC chemokine receptor 4, CCR4）又称CRK4, CMKBR4, ChemR13、K5-5等，属于CC趋化因子受体家族。人CC趋化因子受体4（CCR4）是一种7次跨膜G蛋白偶联受体，主要表达于各淋巴细胞核组织。CCR4的高表达与多种血液系统肿瘤以及恶性实体瘤的浸润、转移和预后相关。已知的CCR4高亲和力配体有两个，分别为胸腺活化调节趋化因子（Thymus and activation regulated chemokine, TARC/CCL17）和巨噬细胞衍生趋化因子（macrophage-derived chemokine, MDC/CCL22）。CCR4主要通过调节性T细胞（Treg）发挥免疫效应，如Treg细胞表面的CCR4通过与其配体CCL22/CCL17的结合趋化Treg细胞，引发免疫逃逸，从而导致不良临床后果[2]。
2018年8月，美国FDA批准莫格利珠单抗（Mogamulizumab）上市，治疗已经接受过至少一次全身性疗法的复发或难治性蕈样真菌病或塞扎里综合症成年患者。莫格利珠单抗是一款人源化CC趋化因子受体4（CCR4）单克隆抗体。皮肤T细胞淋巴瘤是一种罕见的非霍奇金淋巴瘤。其中，蕈样真菌病和塞扎里综合症是皮肤T细胞淋巴瘤最常见的两种类型。这是FDA第一次批准针对赛扎里综合征的药物。
工作原理
人CC趋化因子受体4(CCR4)ELISA试剂盒是体外定量检测生理样本中CCR4蛋白浓度的试剂盒，一般采用双抗体夹心ELISA法。用人CCR4单克隆抗体预包被酶标板，加入适度稀释的样本和标准品，CCR4会与其抗体结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗人CCR4抗体，其与结合在单抗上的CCR4结合形成免疫复合物，洗去游离成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有CCR4，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色；加终止液变黄。在450nm下检测OD值，CCR4浓度与OD450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样本中的CCR4浓度。
图1 人CC趋化因子受体4(CCR4)ELISA检测试剂盒工作原理
应用实例
酶联免疫吸附法（ELISA）是检测目标蛋白质的重要体外检测手段和定量方法。2006年Ueda等[3]报道了CCR4作为免疫疗法靶点治疗癌症的潜力，其中使用人CC趋化因子受体4（CCR4）ELISA试剂盒检测了多种CCR4阳性T细胞系的培养上清液中可溶性CCR4的浓度。这一研究可以确定CCR4抗体药物使用时面临的游离型CCR4的挑战，即CCR4抗体首先被游离型CCR4中和后，剩余部分再去与肿瘤细胞表面CCR4结合。
参考文献
【1】张子欣, 李晖, 王佳慧, 等. CC 亚族趋化因子及其受体在慢性肝病中的作用及机制. 临床肝胆病杂志, 2024, 40(5): 1044-1049.
【2】杨鹏远, 杜成志, 等. 索拉菲尼联合CCR4拮抗剂在抑制癌生长及转移中的应用. CN 106421796A.
【3】R Dueda, T Ishida. CCR4 as a novel molecular target for immunotherapy of cancer. Cancer Sci., 2006, 97(11): 1139-1146.