技术背景
别苏氨酸是非蛋白质氨基酸，是许多具有生物活性多肽的组成部分。D-别苏氨酸常被用做化学合成针对格兰仕阳性菌和阴性菌噻烯酶素抗生素的重要中间体；此外，D-别苏氨酸还是有效抗HIV环形缩肽callipeltins和有效抗菌活性脂肽制磷脂菌素的重要组成部分，具有较为广泛的应用。这里简单介绍D-别苏氨酸的合成方法。
D-别苏氨酸合成方法
南京大学的陆阳在其硕士论文《双酶级联生物合成D-氨基酸研究》中采用了如下方法来合成制备D-别苏氨酸[1]：
1）培养基及培养方法：LB液体培养基为（g/L）：酵母粉5、蛋白胨10、氯化钠10，pH 7.0；LB固体培养基需添加2%的琼脂粉；基因工程菌在培养前加终浓度100μg/mL的氨苄青霉素。大肠杆菌的活化是37℃培养箱中平板倒置培养。大肠杆菌种子培养在37℃条件下转速200rpm的旋转式摇床中培养。采用常规分子克隆技术，经过提取质粒，双酶切，胶回收，连接，转化等相关步骤获得了重组质粒pET-Duet-1-AAR和pGEX-KG-AAR，将其分别导入BL21(DE3)，两基因工程菌分别命名为D-AAR和K-AAR。
2）双酶级联反应制备D-别苏氨酸：在100mL 0.2M磷酸钾缓冲溶液中（pH为8.0），加入1g K-AAR全细胞，4mM磷酸吡哆醛（PLP），5g L-苏氨酸，40℃、170r/min振荡反应。消旋反应结束后，离心除去K-AAR菌体，上清液煮沸灭活残留的K-AAR，冷却至40℃，再加入1g苏氨酸脱氨酶全细胞，40℃振荡反应。结束后得到转化液。
3）转化产物分离：将转化完成的转化液高速离心去除菌泥和其它物质，80℃加热，加活性炭脱色，过滤，用6N HCl调节pH至6.0左右，析出D-别苏氨酸，不断用母液过滤，用蒸馏水洗涤D-别苏氨酸，烘干，得到D-别苏氨酸9.39g。
参考文献
[1]陆阳. 双酶级联生物合成D-氨基酸研究[D]. 南京大学硕士学位论文. 2016.5.20.