研究背景
血小板生成素(thrombopoietin，TPO)是一种可以促进血小板生成的细胞因子，主要由肝脏细胞合成并释放到血液中。TPO与受体结合后，取决于细胞类型的不同，可起到不同的作用，如维持造血干细胞的存活，刺激巨核细胞集落形成细胞、巨核细胞的有丝分裂，刺激巨核细胞成熟，促进血小板的分化与成熟等。关于该物质，现有的检测方法存在血清中TPO蛋白糖基化的异质性导致对部分样本检测值低于实际水平，使TPO血清水平用于区分itp及化疗、再生障碍性贫血导致的血小板减少时的特异性较低的问题。因此，需要开发新的用于血清TPO水平检测的单克隆抗体及免疫测定方法，人血小板生成素(TPO)ELISA KIT应运而生[1]。
原理
应用双抗体夹心法测定标本中人血小板生成素(TPO) 水平。用纯化的人血小板生成素(TPO) 抗体包被微孔板,制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血小板生成素(TPO) ，再与HRP标记的血小板生成素(TPO) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血小板生成素(TPO) 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人血小板生成素(TPO) 浓度[2]。
有关研究
研究发现，人血小板生成素(TPO)基因转导能刺激小鼠生长，将编码人TPO的真核表达质粒pcDNA，3hTPO，野生型pcDNA3或生理盐水注射小鼠后肢肌肉，称量小鼠的体重，器官重。用半定量ELISA检测TPO转导小鼠血清中胰岛素样生长因子(IGF)-Ⅰ,Ⅱ和血小板源生长因子(PDGF)水平，结果发现，TPO基因转导能促进小鼠的生长。这种促生长作用与年龄和性别有关，但与动物的种系无关[3]。所以，TPO是生物研究中的重要物质。用特殊培养基，在特定培养条件下培养携带有编码人血小板生成素蛋白基因序列的被转化的哺乳动物细胞，可以获得该蛋白质产物的高表达收获液，经一系列后处理步骤便可获得纯度高并具有高生物活性的重组TPO[4]。在上述TPO基因的制备与生物研究中，人血小板生成素(TPO)ELISA KIT可用于检测相关物质帮助分析研究结果。
参考文献
[1]朱国庆,方力维,薛峰,等.抗人血小板生成素抗体AF687,试剂盒及其应用:202510509639[P].
[2]人血小板生成素说明书.人血小板生成素(TPO)酶联免疫分析(ELISA)说明书[J].人血小板生成素酶联免疫分析:elisa.
[3]赵建增,陈立敏,梅英杰,等.人血小板生成素cDNA转导促进小鼠生长与胰岛素样生长因子相关[J].中国生物化学与分子生物学报, 2000(04):100-104.DOI:CNKI:SUN:SWHZ.0.2000-04-021.
[4]路明践,苏冬梅,娄竞.重组人血小板生成素制剂的制备生产方法:CN 00109612[P].