大肠杆菌的培养方法及用途

2026/5/30 8:01:08 作者:火华

简介

大肠杆菌作为常用模式菌株,不仅是微生物学研究的经典工具,在肿瘤治疗领域也展现出独特应用价值。它可通过提取菌膜或外膜囊泡组分,构建兼具同源靶向、溶酶体逃逸特性的仿生纳米递送系统,是细菌相关肿瘤治疗研究中重要的功能化生物材料来源。

 大肠杆菌的性状

大肠杆菌的性状

培养方法

将甘油冻存的大肠杆菌菌种(Escherichiacoli,ATCCNo.25922)放室温中化冻,以1:50接种:将100μL的菌液加入到5mL的LB培养基中,放入37℃,200rpm的摇床中,培养18h后作为一代菌。18h后将一代菌转接:将5mL菌液加入到500mL的LB培养基中,放入37℃,200rpm的摇床中继续培养约48h。将菌液以6000rpm离心5min并分散到少量去离子水中,再次离心并分散到40mLTris/HCl缓冲溶液(pH8.0,20mM)中;向缓冲溶液加入600mg溶菌酶,放入摇床(37℃,200rpm)孵育3h;加入400mgSDS,并在冰浴下超声20min(300W,4s开/4s关周期进行)以破碎大肠杆菌,将得到的溶液冷冻干燥;将完全干燥的大肠杆菌碎片分散在氯仿-甲醇-水混合溶液中(氯仿:甲醇:水=30:15:1,v/v/v)并置于37℃,200rpm的摇床中孵育1h,然后利用孔径为0.45μm的PVDF针筒式膜过滤器过滤,将滤液转移至圆底烧瓶内,在常温下旋转蒸发至有机溶剂完全除去,烧瓶内壁附着淡黄色细菌膜,加入3mL磷酸缓冲盐溶液(PBS)后超声使菌膜均匀分散在PBS中,并置于-80℃保存[1]。

用途

大肠杆菌常作为模式菌株,用于构建仿生纳米递送系统的细菌膜载体,通过提取其外膜囊泡或菌膜组分,制备兼具同源靶向、溶酶体逃逸特性的仿生纳米平台,为细菌相关肿瘤治疗提供药物递送的功能化生物材料。例如:研究院针对结直肠肿瘤浸润大肠杆菌与结直肠癌的密切关系和传统药物递送系统存在的靶向效率低、安全性不足等问题,利用仿生纳米技术设计了一种能同时清除肿瘤浸润细菌和杀伤肿瘤的仿生纳米递送系统 CIP@EMV@CaCO₃,其具有较高的生物安全性,能通过溶酶体逃逸、同源靶向功能将抗生素 CIP 精确递送到肿瘤组织内的大肠杆菌,并诱导有效的抗肿瘤免疫反应,有望发展成为未来临床用于细菌相关肿瘤治疗的纳米平台[1]。

参考文献

[1] 廖慧颖. 仿生纳米递送系统用于精确清除肿瘤浸润大肠杆菌并增强结直肠癌的治疗[D]. 北京化工大学, 2025. DOI:10.26939/d.cnki.gbhgu.2025.001998.

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