研究背景
细胞角蛋白19片段抗原21-1(Cytokeratin 19 fragment antigen 21-1，CYFRA21-1)是一种新型肿瘤标志物，在癌症筛查和诊断中尤其是对非小细胞肺癌的筛查和诊断具有重要的作用，近年来备受关注。在肺癌诊断，预后及治疗中，血清中的CYFRA21-1含量水平具有重要的临床意义。目前，研究者开发了酶联免疫吸附分析法，化学发光法，荧光法，免疫层析法，电化学法和表面增强拉曼光谱等方法用于血清中CYFRA21-1的检测，为癌症早期诊断提供了技术支持[1]。本篇我们所介绍的人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA KIT便是应用于酶联免疫吸附分析法的重要试剂。
检测原理
人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)水平。用纯化的人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)，再与HRP标记的细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)浓度[2]。
抗体制备
人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA KIT中，人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA KIT人细胞角蛋白19片段单克隆抗体是该试剂盒生产过程中的重要组分。文献报道了一种人细胞角蛋白19片段 (CYFRA21-1)的单克隆抗体(mAb)的制备方法，并对其免疫特性进行鉴定。
具体地，用重组CYFRA21-1蛋白免疫BALB/c小鼠，取血清效价最高小鼠的 脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合，筛选出阳性杂交瘤细胞株，进行亚克隆，并鉴定分泌抗体亚型；制备小鼠腹水，用protein G从腹水中纯化出CYFRA21-1的mAb；用间接ELISA测定mAb的效价，Western blot和竞争ELISA对mAb的免疫特性进行检测，竞争ELISA对mAb的临床应用性进行评价。结果，获得2G8和12G7两株能稳定分泌人 CYFRA21-1mAb的杂交瘤细胞株，其分泌抗体都为轻链为κ的IgG1。两株mAb都能特异识别人血清中的CYFRA21-1，效价分别为 1×10-6和5×10-7，检测134份血清样本CYFRA21-1含量的结果与北京源德生物医学工程有限公司CYFRA21-1化学发光法定量检测试 剂盒检测结果的相关性分别为y=0.8167x+0.3755(r=0.9772)和y=0.8142x+0.3655(r=0.9770)。也就是说，通过上述过程成功制 备得到两株人CYFRA21-1的特异mAb，这为后期人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA KIT的完全国产化奠定了良好的基础[3]。
应用研究
在临床研究中，大量的实验数据表明，细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)不仅对卵巢癌的诊断具有重要临床应用价值[4]，在采用免疫放射分析法进行的肺癌诊断研究中，实验结果也表明，免疫放射分析法检测血清CYFRA21-1的水平对于提高肺癌检出率及其临床分型的鉴别诊断具有重要意义[5]。基于上述研究结果，人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA KIT的发明可以结合光学分析对新型肿瘤标志物CYFRA21-1进行快速筛查诊断，这对于临床研究意义重大。
参考文献
[1]董嘉晖,沈丽悦,祀吉豪,等.细胞角蛋白19片段抗原21-1检测方法的研究进展[J].分析化学, 2025(3).
[2]中国化工仪器网.人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)酶联免疫分析(ELISA)说明书[J].试验机.
[3]刘红,刘宾,李瑞娟,等.人细胞角蛋白19片段单克隆抗体的制备和鉴定[J].中国医药生物技术, 2012, 7(6):6.DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2012.06.005.
[4]王建英,程建新,王淑英,等.细胞角蛋白片段抗原21-1检测对卵巢癌诊断的价值[J].实用癌症杂志, 2004.DOI:CNKI:SUN:SYAZ.0.2004-04-013.
[5]李敬,戚小惠,蔡新霞,等.细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)检测对肺癌临床诊断价值的研究[J].大连医科大学学报, 2003, 025(001):52-53.