简介
WNT6抗体多为兔或小鼠来源的多克隆或单克隆抗体，识别位点位于WNT6蛋白的C端或中段保守序列，适用于人、鼠等物种的样本检测。市面上常见的商业抗体由Proteintech、Abcam、Santa Cruz等公司提供，货号如Proteintech的“WNT6 antibody（catalog no. 12345-1-AP）”较为常用。其分子量识别范围在约40 kDa左右，适合用于Western blot检测，同时在免疫组化、免疫荧光等实验中也表现出良好的组织穿透性和抗原亲和力。抗体通常以冻干粉或稀释液形式提供，需在-20°C保存，避免反复冻融。使用前建议根据说明书进行稀释优化，确保信噪比适中，避免非特异性结合[1]。
WNT6抗体的性状
应用特点
在免疫组化实验中，WNT6抗体常用于检测组织切片中WNT6蛋白的表达定位，尤其在肿瘤组织与正常组织中的差异表达研究中具有重要价值。实验前通常需进行抗原修复处理，如热诱导抗原修复（HIER）结合柠檬酸缓冲液（pH 6.0）以增强抗原表位暴露。抗体孵育条件一般为4°C过夜或室温1小时，稀释比例常见为1:100至1:200。显色系统多采用HRP标记的二抗结合DAB底物，阳性信号呈棕黄色，常定位于细胞质或细胞膜区域。为验证抗体特异性，实验中常设置阴性对照（如PBS替代一抗）及阳性对照（已知高表达组织），以确保染色结果的可靠性。图像采集后可通过半定量评分系统（如H-score）进行表达强度分析，辅助判断WNT6在不同组织中的表达差异[1]。
使用规范
Western blot是验证WNT6蛋白表达水平变化的重要手段，WNT6抗体在实验中需表现出高特异性和低背景干扰。常规操作流程包括蛋白提取、SDS-PAGE电泳、转膜、封闭、抗体孵育及显色。抗体孵育条件通常为4°C过夜，稀释比例在1:500至1:1000之间，具体浓度需根据抗体批次和样本类型进行优化。二抗多选用HRP标记的抗兔或抗小鼠IgG，稀释比例为1:5000至1:50000不等。显色系统采用ECL化学发光法，曝光时间控制在30秒至2分钟之间，条带应出现在约40 kDa位置。为验证抗体的特异性，常通过siRNA或shRNA敲低WNT6表达，观察目标条带是否减弱或消失。此外，建议同步检测内参蛋白（如β-actin或GAPDH）以确保上样量一致，增强实验数据的可比性与可信度[1]。
参考文献
[1] 李莹. WNT6通过激活经典WNT和Notch1信号通路参与卵巢癌发生和发展[D]. 广州医科大学, 2024. DOI:10.27043/d.cnki.ggzyc.2024.000502.