介绍
N-FMOC-N'-生物素-L-赖氨酸是一种带有生物素修饰的保护型赖氨酸衍生物，广泛应用于固相肽合成（SPPS）中。分子式为C33H44N4O7S。外观为白色至浅黄色粉末，易溶于DMF、DMSO等有机溶剂，水中溶解度有限。赖氨酸（Lys）侧链氨基经过生物素（Biotin）修饰，N端氨基则被FMOC（9-芴甲氧羰基）保护。生物素的强亲和力使得该分子在生物分子标记、亲和纯化及免疫检测中有重要作用。此衍生物具备良好的合成稳定性和高纯度，适合用于肽链中引入生物素标签，实现多功能分子设计。赖氨酸主链氨基以FMOC保护，侧链ε-氨基连接生物素，形成稳定共价结构。
图一 N-FMOC-N'-生物素-L-赖氨酸
应用
N-FMOC-N'-生物素-L-赖氨酸主要应用于固相肽合成，作为生物素标签引入肽分子中，用于免疫检测、蛋白质-配体相互作用研究、生物素-亲和素系统的构建。其生物素标签便于后续亲和纯化和检测步骤，广泛应用于抗体标记、细胞标记及生物传感器开发。该衍生物也用于合成多功能肽和核酸-肽偶联物，提升分子的识别与结合能力。
合成
以1.0 mmol规模合成Fmoc-Lys(biotin)-OH时，取386.9 mg 9-氟苯甲氧基羰基-L-丙氨酸盐酸盐与212 μL DIPEA溶于5-10 mL无水DMF，中和后加入418.5 mg 9-氟苯甲氧基羰基-L-丙氨酸盐酸盐，室温避光搅拌4-8 h（TLC监测反应完全），35-40℃减压浓缩至1-2 mL粘稠液，滴入预冷至-20℃的50 mL无水乙醚中沉淀，经离心洗涤得粗产物，再通过硅胶柱层析（DCM/MeOH 10:1→8:1梯度洗脱）纯化，35℃真空干燥4-6 h后获白色粉末纯品N-FMOC-N'-生物素-L-赖氨酸，得率65%-75%、HPLC纯度≥95%，全程需保持无水体系，避免高温破坏Fmoc保护基[1]。
图二 N-FMOC-N'-生物素-L-赖氨酸的合成
参考文献
[1]Ohno Y ,Vinogradov A A ,Suga H .Selective pH-Responsive Conjugation between a Pair of De Novo Discovered Peptides.[J].Journal of the American Chemical Society,2024,DOI:10.1021/JACS.4C08520.