简介
Cyclo(RGDFK) 是一种环状五肽，由精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸（Arg-Gly-Asp-Phe-Lys）通过头尾酰胺键环化而成，外观为白色至类白色冻干粉末，无臭，易吸湿。该化合物常温下稳定，但需避光、低温（–20 °C）干燥保存。长期需冷冻干燥并充氮密封，避免反复冻融及强酸强碱。
CYCLO (RGDFK)的性状
合成
在聚乙烯多肽合成容器中手动进行多肽合成，其底部有一个熔块，顶部有一个用于添加试剂的隔膜的螺旋盖。用抽吸除去溶剂和可溶性试剂。洗净之间的混合物去保护。用DMF（4 × 1分钟）、DCM （4 × 1分钟）、IPA（4 × 1分钟）进行混合。用20%哌啶/DMF治疗Fmoc组（2 × 7分钟）。在固相反应器中称取Wang树脂（0.1 mmol）。用DMF，DCM和IPA清洗树脂。将混合物在DCM中膨胀1小时。激活第一个氨基酸N-a-Fmoc-Leu（234 mg， 4个等量），DCB （57 mL，4个等量），吡啶（54 mL，6个等量）5分钟。将活化的氨基酸加入膨胀的树脂中。将反应混合过夜。用胡椒碱edmf溶液（1:4）去除第一个氨基酸的Fmoc保护基团。通过在DMF中连续添加受保护的氨基酸（2个等量）、BOP（86 mg，1.95等量）、HOBt （27 mg，2等量）和NMM （50 mL，4.5等量），使用标准Fmoc程序组装线性肽1-2小时。加入最后一个氨基酸后，用20%哌啶在DMF中除去n端Fmoc基团（2 × 10分钟）。用DMF和IPA清洗树脂。用TFA-TIPS-H2O（95:2.5:2.5, 7.5 mL）从树脂上切割肽。将所得混合物搅拌2小时，然后用TFA: CH2Cl2（1:9, 7 mL）洗涤。将酸洗液浓缩至约1ml。用冷却的乙醚沉淀混合物。通过离心收集沉淀物。用冰冷的干乙醚（4 × 30 mL）洗涤沉淀。分离沉淀物。在氮气流中干燥沉淀物。将混合物冷冻干燥。用制备型高效液相色谱法纯化粗产物。将Fmoc-Asp-OAll（119mg，3等量）和DIPEA（210ml，12等量）溶液加入干CH2Cl2至2-氯三烷基树脂（0.1 mmol）中。盖上树脂。移除Fmoc保护组。使用标准的Fmoc程序组装线性五肽。加入最后一个氨基酸后，用Pd(PPh3)4（0.16当量）和PhSiH3（16当量）在DCM/DMF中处理2小时，去除c端烯丙基酯。用二乙基二硫代氨基甲酸钠盐洗涤反应混合物。用piperidineeDMF（1:4）去除n端Fmoc组，然后在DMF中加入BOP(1.95等量，86 mg), HOBt （27 mg，2等量）和NMM（50 mL，4.5等量）2小时，使树脂环化并得到环化肽。用TFA:CH2Cl2（1:1, 8ml）处理混合物2小时。用TFA:CH2Cl2（1:9）洗涤混合物得到标题化合物CYCLO (RGDFK)[1]。
参考文献
[1] Decoration of polymeric micelles with cancer-specific peptide ligands for active targeting of paclitaxel. By: Shahin, Mostafa; et al. Biomaterials (2011), 32(22), 5123-5133.