一、理化性质
5-氨基荧光素（5-Aminofluorescein，化学式：C19H13NO5，CAS号：3326-34-9）是一种含有氨基取代基的荧光素衍生物，属于荧光染料家族。它在紫外光照射下呈现出强烈的绿色荧光，具有独特的光谱特性和化学反应性。由于其结构中包含氨基基团，5-氨基荧光素在多种应用中表现出良好的反应性和标记能力[1]。
5-氨基荧光素的分子结构由一个荧光素核心骨架和一个位于5位的氨基取代基组成。该分子在常温下呈红棕色固体，溶于甲醇、二甲基亚砜（DMSO）和丙酮等溶剂。其最大吸收波长（λmax）约为492 nm，发射波长约为515 nm，显示出典型的绿色荧光。该化合物的熔点约为223℃，水溶性较差，但在甲醇中的溶解度约为10 mg/mL。其分子量为347.32 g/mol，pKa值约为9.34，显示出弱碱性特性[1]。
图1 5-氨基荧光素的外观
二、制备方法
5-氨基荧光素的合成通常包括以下步骤：
（1）制备4-氨基邻苯二甲酸：将4-硝基邻苯二甲酸、N2H4·H2O、FeOOH混合，在90~110℃下回流反应2~3h，趁热过滤，调节pH至3~4，冷动至室温后冷藏至不再有固体析出，抽滤，滤饼用水洗涤至中性，干燥，得到4-氨基邻苯二甲酸；
（2）制备5-氨基荧光素：向步骤（1）制备得到的4-氨基邻苯二申酸中依次加入间苯二酚、甲烷磺酸，在惰性气体保护下，95~100℃下反应1~3 h，冷却反应液至室温后倾入冰水中，调节体系pH至5~6，静置冷藏至不再有固体析出，抽滤，滤饼用水洗涤至中性，干燥，即得5-氨基荧光素[1]。
三、应用领域
1. 生物标记与探针
5-氨基荧光素可作为分子探针，标记特定的生物分子或细胞结构。其氨基基团可与其他分子发生共价结合，形成稳定的标记物。例如，5-氨基荧光素可与人血清白蛋白（HSA）共价结合，作为靶向药物递送系统的组成部分。此外，它还可用于标记纳米颗粒，以研究其在细胞内的摄取和分布[1]。
2. 荧光成像与显微镜技术
由于其优异的荧光特性，5-氨基荧光素广泛应用于荧光显微镜和共聚焦显微镜技术中。它可用于观察细胞内的结构变化、蛋白质定位以及细胞间相互作用等。其绿色荧光信号清晰，背景噪声低，适合于高分辨率成像[1]。
3. 分子检测与分析
5-氨基荧光素在分子检测中具有重要应用。它可作为荧光标记物，用于检测特定的分子或离子。例如，5-氨基荧光素可用于检测亚硝酸盐的存在，其与亚硝酸盐反应生成荧光产物，便于定量分析[1]。
4. 药物递送系统
在药物递送研究中，5-氨基荧光素作为标记物，帮助研究人员追踪药物在体内的分布和释放情况。通过与药物分子共价连接，5-氨基荧光素可用于观察药物在细胞或组织中的积累和作用机制[1]。
参考文献
[1] 安康学院. 一种荧光试剂5-氨基荧光素的制备方法: 202210860940.2 [P]. 2023-05-16.