瑞氏染色液是临床医学检验中应用频率最高,使用最广泛的染色方法。除用于膜片外,更用于骨髓及脱落细胞检查。它与其同类型的染色方法如姬姆萨氏染色等均源于俄国罗曼诺夫斯基染色法(nomannowskysstain)是瑞忒氏(wrigh’s)于1902年创造的,它在临床应用近百年,比其它类同染色法更受欢迎[1]。然而,传统瑞氏染色液在配制和使用中一直存在刚配好不能染色、放置过久染效下降的缺陷[2]。为了克服这一缺点,研究人员一直在对进行改进,随着对染料化学行为的深入认识以及多种改良配方的问世,更多瑞氏染色液(WRIGHT STAIN,即用型)问世,这种染液的核心成分是瑞氏色素,它由酸性染料伊红(Eosin)和碱性染料亚甲蓝(Methylene Blue) 结合而成,真正实现了开瓶即染、结果稳定,成为检验科日常工作的可靠工具。
工作原理
瑞氏染色利用的是细胞成分对不同染料的亲和力差异,也就是“嗜酸性”和“嗜碱性”的原理。嗜酸性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒等,会被伊红染成粉红色或橘红色。嗜碱性物质如细胞核蛋白、淋巴细胞胞浆等,会被亚甲蓝染成紫蓝色或蓝色。嗜中性物质如中性颗粒,因与两种染料均可结合,呈现为淡紫红色。通过这种区分,可以在显微镜下清晰地识别红细胞、各类白细胞(如中性、嗜酸、嗜碱性粒细胞)以及血小板等等。
保存与注意事项
瑞氏染色液(WRIGHT STAIN,即用型)需在室温下避光保存,防止因光照和高温导致染料分解。其有效期通常为12至24个月。其溶液中含有甲醇,主要作用是溶解染料和固定细胞。这使得染液本身具有易燃性和一定的毒性,使用时需注意通风和安全。染色效果对pH值非常敏感,理想的染色环境是中性(pH 6.4-6.8)。因此,冲洗时最好使用磷酸盐缓冲液(PBS) 或中性蒸馏水,否则可能导致细胞染色偏蓝或偏红,影响判断。
现代商品化的瑞氏染色液(WRIGHT STAIN,即用型)具有突出优势。第一,无需等待,开瓶即可直接染色,节省了数月的成熟期;第二,批间稳定,通过标准化工艺控制吸光度比值和pH值(中性6.4-6.8),确保每次染色结果一致;第三,染色清晰,细胞核呈紫蓝色,胞浆及颗粒着色分明,透明度高;第四,操作简便,无需研磨、无需调配,减少甲醇挥发对操作人员的伤害。
参考文献
[1] 汪先春, 汪奇伟, 周寿麟. 对瑞氏染色液性能的新见及配制改良探讨[J]. 中原医刊,1998,25(10): 44.
[2] 郁华, 崔秀华. 改进瑞氏染色液配制方法的体会[J]. 实用医技, 2000,7(12):941.
[3] 樊菊娥, 李雯, 乔小兴, 梁维岗. 五种瑞氏染色液对比观察[J]. 上海医学检验杂志, 1998,13(1):64.