简介
4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑是经典的荧光标记与衍生化试剂，常温下为淡黄色至黄色结晶性粉末，微溶于水。其分子中的氯原子具有强亲电反应活性，**主要用于与含氨基、羟基的化合物发生亲核取代反应，生成具有强荧光特性的NBD衍生物，广泛应用于分析检测、药物分子标记等领域。
4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑的性状
用途
4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑主要作为荧光标记及衍生化试剂，与N-羟基乙酸乙酯发生亲核取代反应，用于制备NBD类荧光衍生物。例如：将N-羟基乙酸乙酯（35 mg，0.34 mmol，3当量）溶解在H2O（2 mL）中。加入碳酸钠（100毫克，0.94毫摩尔，7.5当量）。让反应混合物搅拌10分钟。加入4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑（25毫克，0.125毫摩尔，1当量）。让混合物在室温下搅拌15分钟。通过真空过滤分离所得沉淀，得到N-7-硝基苯-[2,1,3-d]-恶二唑-4-酰氧基乙酰亚胺乙酯[1]。
4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑还可作为亲电荧光衍生试剂，与含羟基或氨基的化合物发生亲核取代反应，用于合成荧光标记衍生物。例如：将（S）-叔丁基-3-羟基-1-（2-硫乙基氨基）-1-氧代-丙-2-基氨基甲酸酯（0.15 mmol）加入到4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑30 mg，0.125 mmol）的无水CH2Cl2（2 mL）、吡啶（0.15 mmol，催化量的DMAP（0.1）溶液中。在室温下搅拌反应混合物24小时。用NaHCO3淬灭反应混合物。用EtOAc萃取反应混合物。用1N HCl和盐水洗涤反应混合物。在Et2O上干燥有机层。过滤有机层。去除溶剂。通过快速色谱法（Hex/EtOAc 1:1）纯化粗残渣[2]。
4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑可与含氨基有机化合物发生亲核取代反应，用作荧光标记试剂以制备相应荧光衍生物。例如：将（2E，4E）-N-（4-（（6-氨基己基）氧基）-3-甲氧基苯乙基）十二碳-2,4-二烯酰胺（15 mg，34µmol）溶解在CHCl3和MeOH（1:1，3 mL）的混合物中。加入碳酸氢钠（0.3 m，1 mL）。加入4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑（10mg，51µmol）后，在室温下搅拌混合物18小时。加水（10mL），用CHCl3（3x5mL）萃取混合物。分离合并的有机层，用无水MgSO4干燥。减压除去溶剂。用途硅胶色谱法（己烷/乙酸乙酯1:1）得到产物[3]。
参考文献
[1] Detection of Cellular Sialic Acid Content Using Nitrobenzoxadiazole Carbonyl-Reactive Chromophores By: Key, Jessie A.; et al. Bioconjugate Chemistry (2012), 23(3), 363-371.
[2] The Fight against the Influenza A Virus H1N1: Synthesis, Molecular Modeling, and Biological Evaluation of Benzofurazan Derivatives as Viral RNA Polymerase Inhibitors By: Pagano, Mafalda; et al. ChemMedChem (2014), 9(1), 129-150.
[3] Synthesis and Biological Evaluation of Endocannabinoid Uptake Inhibitors Derived from WOBE437 By: Maeder, Patrick; et al. ChemMedChem (2021), 16(1), 145-154.