介绍
鲑鱼精DNA是从大西洋鲑或太平洋鲑的成熟精巢中提取的高分子量双链DNA，具有来源丰富、纯度高、性质稳定且成本低廉的特点，用于核酸定量、杂交封闭、酶活性测定等领域，覆盖了从基因克隆到PCR诊断等方面。它具有双链DNA结构，平均分子量约为20-30kb，片段长度分布均匀，A260/A280比值稳定在1.8±0.1，符合纯DNA的质量标准，其核苷酸组成中GC含量约为41%。
图一 鲑鱼精DNA
优势
鲑鱼精DNA与大多数哺乳动物基因组接近。与鸡红细胞DNA、细菌DNA等其他来源的DNA相比，鲑鱼精巢中DNA含量极高，占细胞干重的60%以上，特别适合大规模制备，同时精细胞结构简单，蛋白质和RNA污染少，纯化难度更低，且冻干品可在室温下长期保存，溶液在4℃也能稳定保存6个月以上。
提取
传统的鲑鱼精DNA制备采用苯酚-氯仿抽提法，步骤包括精巢组织匀浆、蛋白酶K消化、苯酚-氯仿去蛋白、乙醇沉淀和TE缓冲液溶解，这种方法虽然能获得高纯度DNA，但操作繁琐且需要使用有毒试剂。
1.样品裂解：将鲑鱼精组织或细胞悬液加入裂解缓冲液（含 10 mmol/L Tris-HCl pH7.8、5 mmol/L EDTA pH8.0、3 mg/mL 溶菌酶），37℃孵育 1 小时；随后加入 20% SDS 和 1 mg/mL 蛋白酶 K，55℃过夜消化，使细胞完全破裂并释放基因组 DNA。
2.DNA 吸附：取裂解上清液，与等体积 pH7.0-8.0 的磷酸盐缓冲液混合，加入 2 mg/mL 的氨基修饰磁性颗粒（推荐 PLL 修饰氧化铁纳米颗粒，吸附效率更高），室温孵育 15 分钟（吸附时间延长至 60 分钟无显著提升）。DNA 通过静电作用结合到带正电的颗粒表面，约 50% 的初始 DNA 可被有效吸附，且 pH 在 7-8 范围内对吸附效率无明显影响。
3.杂质洗涤：利用磁分离架收集磁性颗粒，弃去上清液；用 300 μL 70% 乙醇洗涤颗粒 2 次，充分去除残留的蛋白质、盐类等杂质，随后室温干燥除去乙醇。
4.DNA 洗脱：向干燥的颗粒中加入 100 μL TE 缓冲液（pH9.0，可添加 10 mmol/L KCl 提升洗脱效率），22℃孵育 60 分钟（与 18 小时洗脱效果相当）；若需更高浓度 DNA，可将洗脱温度提高至 55-90℃，但高温可能导致少量杂质共洗脱，降低 DNA 纯度。
5.纯度与定量：洗脱完成后磁分离收集上清液，即为纯化的鲑鱼精 DNA。通过紫外分光光度计测定 A260/A280 比值（理想值为 1.8-1.9）评估纯度，提取的 DNA 可直接用于 PCR、分子杂交等后续分子生物学实验。
图二 提取示意图
应用
鲑鱼精DNA除了是核酸定量实验中的标准品，还是核酸杂交实验中最常用的非特异性封闭剂，在Southern印迹、Northern印迹和原位杂交实验中，预先加热变性为单链的鲑鱼精DNA能够结合硝酸纤维素膜或尼龙膜上的未结合位点，防止标记探针与膜发生非特异性结合，从而有效降低背景噪音，显著提高杂交信号的信噪比，使用时其浓度一般控制在100-200μg/mL。
在磷酸钙转染和脂质体转染实验中，鲑鱼精DNA常被用作载体DNA，它能够增加总DNA浓度，促进DNA-磷酸钙复合物的形成，同时保护质粒DNA免受核酸酶的降解，尤其在低质粒浓度下能显著提高转染效率。此外，它还被广泛用作PCR实验的阴性对照，不含目标基因的特性使其能够有效检测试剂污染和交叉污染，在提取低浓度DNA时加入作为共沉淀剂可大幅提高回收率，在EMSA和ChIP等蛋白-DNA相互作用研究中则作为非特异性竞争DNA，排除非特异性结合的干扰。
使用
合格的鲑鱼精DNA应满足一系列质量指标，包括A260/A280比值在1.7-1.9之间，无蛋白质和RNA污染，A260/A230比值大于2.0，无盐和有机溶剂残留，琼脂糖凝胶电泳显示为单一的高分子量条带且无明显降解，同时不含DNase、RNase活性和PCR抑制剂。用于封闭和转染实验时，必须将鲑鱼精DNA在100℃加热10分钟后迅速置于冰上冷却，使其保持单链状态才能发挥最佳效果，为避免反复冻融导致DNA降解，应将溶液分装成小份在-20℃保存，且每批新的鲑鱼精DNA使用前都需要通过紫外分光光度法准确测定浓度[1]。
参考文献
[1]Kone?ná J ,Romanovská D ,Horák D , et al.Optimalization of deoxyribonucleic acid extraction using various types of magnetic particles[J].Chemical Papers,2019,73(5):1247-1255.DOI:10.1007/s11696-018-00675-9.