介绍
N,N-二乙基乙酰胺（N,N-Diethylacetamide, DEA）是一种结构简单的酰胺类有机溶剂，长期以来仅作为工业溶剂和药物辅料使用。DEA 及其同系物 N,N - 二丙基乙酰胺（DPA）是高度选择性的核因子 κB（NF-κB）通路抑制剂，能够在体外、离体和体内模型中强效抑制炎症反应，并完全预防脂多糖（LPS）诱导的小鼠早产（Preterm Birth, PTB）。
图一 N,N-二乙基乙酰胺
作用
通过细胞毒性实验确定，N,N-二乙基乙酰胺在浓度≤10mM 时对 RAW 264.7 巨噬细胞、HTR-8/SVneo 滋养层细胞和人胎盘外植体均无明显毒性。在 LPS 刺激的 RAW 264.7 巨噬细胞中，10mM DEA 显著抑制一氧化氮（NO）的分泌（P<0.001），并下调诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的蛋白表达（P<0.001）。同时，DEA 剂量依赖性地抑制多种促炎细胞因子和趋化因子的分泌：
对粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的抑制率超过 90%；对 IL-1β 的抑制效果优于阳性对照药 BAY 11-7082（经典 NF-κB 抑制剂）；显著降低 TNF-α、IL-6、单核细胞趋化蛋白 - 1（MCP-1）和 IL-10 的分泌水平。
在 HTR-8/SVneo 人滋养层细胞中，N,N-二乙基乙酰胺同样表现出强大的抗炎活性。10mM DEA 对 IL-6 和 IL-8 的抑制率分别达到 85% 和 90% 以上，均显著优于 5μM BAY 11-7082，同时有效抑制 MCP-1 的分泌。HTR-8/SVneo 细胞中未检测到 TNF-α、IL-1β 和 GM-CSF 的基础分泌，这与滋养层细胞的生理特性一致。
10mM N,N-二乙基乙酰胺能够显著抑制 LPS 诱导的所有检测指标：
促炎细胞因子：TNF-α（P<0.0001）、IL-6（P<0.0001）、GM-CSF（P<0.0001）；
趋化因子：IL-8（P<0.0001）、MCP-1（P<0.001）；
抗炎细胞因子：IL-10（P<0.0001）。
乳酸脱氢酶（LDH）实验证实，所有浓度的N,N-二乙基乙酰胺均未引起胎盘外植体的细胞损伤，证明其抗炎作用并非源于细胞毒性。
在 LPS 诱导的小鼠早产模型中，妊娠第 15.5 天（E15.5）腹腔注射 50mg/kg LPS 可导致所有小鼠在 21 小时内分娩。而在 LPS 注射前 15 分钟和注射后 10 小时分别给予 750mg/kg N,N-二乙基乙酰胺的小鼠，100%（6/6）在实验终止时（LPS 注射后 25 小时）仍未分娩，与 LPS 组相比差异极显著（P<0.01）。低剂量组（375mg/kg DEA）也显示出一定的保护效果，2/8 小鼠未分娩，且平均分娩时间比 LPS 组延迟约 2 小时，呈现出明显的剂量依赖性。
作用机制
抑制IκB-α降解
LPS 刺激 RAW 264.7 细胞 15 分钟后，胞质中的 IκB-α 会被 IκB 激酶（IKK）磷酸化并经蛋白酶体降解，从而释放 NF-κB 二聚体。Western blot 结果显示，10mM DEA 预处理能够显著抑制 IκB-α 的降解（P<0.01），使其蛋白水平维持在接近未刺激对照组的水平。证明N,N-二乙基乙酰胺作用于 NF-κB 通路的上游环节，通过阻止 IκB-α 的降解来抑制 NF-κB 的核转位和转录激活。
抑制NF-κB转录活性
在过表达 TLR4 的 HEK 293 细胞中，LPS 刺激可使 NF-κB 的转录活性升高约 10 倍，而 10mM N,N-二乙基乙酰胺能将其抑制至基础水平的 2 倍以下（P<0.0001），效果略优于 5μM BAY 11-7082。DEA 在所有测试浓度下均不影响激活蛋白 - 1（AP-1）和 CCAAT / 增强子结合蛋白（C/EBP）的转录活性。这两种转录因子主要由 MAPK 通路激活，参与多种炎症和细胞增殖过程。
对MAPK通路无影响
Western blot 分析显示，LPS 刺激可显著诱导 JNK1、ERK1/2 和 p38 MAPK 的磷酸化，但N,N-二乙基乙酰胺预处理对这三种激酶的总蛋白水平和磷酸化水平均无任何影响。证明 DEA 是一种高度选择性的 NF-κB 抑制剂，其抗炎作用不涉及 MAPK 通路。目前，DEA 抑制 IκB-α 降解的具体分子靶点尚未完全阐明。有研究提示其母体化合物 DMA 可能作为溴结构域配体发挥表观遗传调控作用[1]。
图二 作用机制图
参考文献
[1]Gorasiya, S., Mushi, J., Yoganathan, S. et al. N,N-Diethylacetamide and N,N-Dipropylacetamide inhibit the NF-kB pathway in in vitro, ex vivo and in vivo models of inflammation-induced preterm birth. Sci Rep 15, 29861 (2025). https://doi.org/10.1038/s41598-025-16076-4