A9小鼠皮下结缔组织细胞（A9 mouse subcutaneous connective tissue cells）是一种源自C3H/An品系小鼠皮下结缔组织的成纤维样贴壁细胞系，因其具有稳定的遗传背景和明确的代谢缺陷（如HPRT和APRT双缺失），在遗传学、毒理学及细胞生物学研究中被广泛应用。近年来，A9小鼠皮下结缔组织细胞更成为海洋生物毒素细胞毒性评估的重要体外模型。有研究利用A9小鼠皮下结缔组织细胞与人横纹肌瘤细胞（A-673）比较了两种常见致害水母，沙蜇（Nemopilema nomurai）和白色霞水母（Cyanea nozakii）的刺丝囊毒素的细胞毒性，为水母蜇伤的风险评估提供了关键数据[1]。
态与特性
A9小鼠皮下结缔组织细胞呈典型的成纤维细胞样，贴壁生长时呈长梭形或星形，单层排列可能呈漩涡状。其具有较强的体外增殖能力，传代至50代后仍能维持相对稳定的特性。染色体核型为超二倍体（hyperdiploid），染色体数目在46到54条之间，以52条为主。存在多个标志染色体。该细胞在裸鼠体内可致瘤，阳性。
科研应用
因A9小鼠皮下结缔组织细胞的HPRT缺陷，A9细胞是构建人-鼠杂交细胞株的经典工具，用于人类染色体定位和基因图谱研究。其HGPRT缺陷也使其广泛用于基因突变筛选实验，研究各种诱变剂的效果。另外A9细胞是外源基因转染的理想宿主，用于研究基因表达和功能。提供定制的A-9-Cas9细胞系，可用于CRISPR文库筛选和基因敲除。由于缺乏胸苷激酶（TK），无法利用外源胸苷，在含BrdU的培养基中存活率高，避免DNA掺入毒性，适于长期培养。在病毒学研究中，对伪狂犬病毒(PRV)、水疱性口炎病毒(VSV)和单纯疱疹病毒(HSV)等敏感，是研究病毒复制、致病机制和抗病毒药物的良好模型。
在细胞工程与免疫学中，可用于杂交瘤制备和单克隆抗体生产，也能用于细胞间通讯、辐射敏感性及嘧啶代谢通路等研究。并且可作为研究成纤维细胞功能和细胞外基质（ECM）代谢的体外模型。
研究案例
在研究中，采用对数生长期的A9小鼠皮下结缔组织细胞，以4×10³ cells/mL的密度接种，分别暴露于不同浓度（16.4~147.5 μg/mL）的沙蜇或白色霞水母刺丝囊毒素提取液，作用时间24~96 h，通过MTT法测定细胞存活率[1]。结果显示，两种水母毒素对A9小鼠皮下结缔组织细胞的存活率均呈显著的时间和剂量依赖性抑制。且白色霞水母毒素的细胞毒性显著强于沙蜇。
优A9小鼠皮下结缔组织细胞在毒理学研究中的优势
A9小鼠皮下结缔组织细胞之所以适用于此类毒性比较研究，主要得益于其以下特点：（1）来源于皮下结缔组织，直接模拟水母蜇伤的首要靶组织。（2）体外培养条件成熟、增殖稳定，便于开展大规模剂量-效应实验。（3）遗传背景清晰（HPRT⁻/APRT⁻），可避免某些代谢干扰。（4）对多种毒素敏感，可重复性好。因此，A9小鼠皮下结缔组织细胞不仅是水母毒素研究的常用工具，也可推广至其他海洋生物毒素、环境污染物及药物筛选的细胞毒性评价中[1]。
参考文献
[1] 徐金涛, 张学雷, 庞敏. 沙蜇和白色霞水母刺丝囊毒素的细胞毒性比较研究[J]. 海洋科学进展, 2014, 32(4): 543-550.