磷酸-4-硝基苯酯二钠盐（p-NPP/PNPP）是常用磷酸单酯底物，可被碱性磷酸酶催化水解，用于测定碱性磷酸酶活性，筛选高产ALP微生物菌株。同时作为ELISA关键底物，不同来源产品稳定性佳，适用于肺炎球菌疫苗血清抗体临床检测。
应用研究
碱性磷酸酶(ALP)是一种底物特异性较弱的磷酸单酯酶,在诊断学、生物化学、分子生物学等领域具有重要应用价值,在环境保护和畜禽保健方面也有着潜在的应用前景。李湘等人以有机质丰富的土壤微生物为样本,采用LB平板分离复筛,以磷酸-4-硝基苯酯二钠盐(p-NPP)为底物测定酶活性,成功分离到一株高产ALP的菌株,命名为39-15株。经16SrRNA测序鉴定,鉴定为奇异虚构芽孢杆菌(Fictibacillus barbaricus)，优化产酶培养条件表明,最适培养基为固氮类芽孢杆菌培养基,最适培养温度为37℃,最适培养时间为16h,最适碳源为甘油,而额外添加氮源能够显著抑制产酶。研究结果表明,39-15株可能为ALP的高效生产提供了一株良好的菌种[1]。
石刚等人验证不同来源的关键试剂在检测肺炎球菌疫苗人血清临床试验中抗荚膜多糖IgG抗体ELISA方法的适用性。方法：基于已建立的ELISA方法,以质控血清09CS为标准,检验两种不同来源的底物磷酸-4-硝基苯酯二钠盐(PNPP)和二抗的适用性. 结果 两种不同来源的磷酸-4-硝基苯酯二钠盐检测质控血清09CS中24个血清型的IgG抗体检测结果无显著性差异,变异系数均在20%以内。在二抗适用性验证结果中有98%的检测结果回收率的偏差在±40%的范围内;比较不同公司二抗对09CS检测结果无统计学差异,相关系数r2为0.9823,线性关系良好;同时对检测结果进行林氏一致性相关系数(rc)分析,证实rc为0.9719,进一步表明两组数据的相关性高度一致;对使用不同二抗的检测结果进行统计学分析,均无差异,r2和rc分别为0.8596和0.9211,显示两组数据的高度一致。结论，本研究所采用的不同来源的关键试剂磷酸-4-硝基苯酯二钠盐和二抗均可满足肺炎疫苗临床血清ELISA检测的要求[2]。
参考文献
[1] 李湘,王敏成,郑金,等. 一株产碱性磷酸酶奇异虚构芽孢杆菌的分离鉴定及其产酶条件优化[J]. 饲料工业,2026,47(2):174-179. DOI:10.13302/j.cnki.fi.2026.02.023.
[2] 石刚,郭丽娜,刘文宾,等. 肺炎球菌疫苗人血清IgG抗体ELISA检测方法关键试剂的适用性探究[J]. 中国医药生物技术,2025,20(5):496-505. DOI:10.3969/j.issn.1673-713X.2025.05.003.