背景[1-4]
PureLink Pro 96 Genomic DNA Purification Kit可实现高产量,高纯度,从在高通量平台的各种样品类型的基因组DNA(gDNA的)萃取。该单一试剂盒可使用熟悉的二氧化硅半裙96孔板格式从血液,组织,细胞,细菌,拭子和血斑中纯化基因组DNA。

PureLink Pro 96 Genomic DNA Purification Kit可以与其它试剂一起用于许多不同的样本类型。PureLink Pro 96 Genomic DNA Purification Kit可用于包括哺乳动物细胞和组织,FFPE组织,Oragene™-preserved唾液,小鼠和大鼠的尾巴,未成核的全血(人,小鼠),有核全血(鸟),纸上的血斑,细菌细胞和酵母细胞的DNA纯化。
PureLink Pro 96 Genomic DNA Purification Kit提供了96孔板此外,带有环形套环的板式喷嘴可防止样品的交叉污染,并改善二氧化硅膜的干燥,防止乙醇携带。半裙板设计与机器人工作站上的大多数真空移液管兼容。
使用PureLink Pro 96 Genomic DNA Purification Kit可以获得更高产量的高纯度gDNA(由A 260/A 280测量确定);从细菌到组织再到血液再到细胞。A 260/A 280和A 260/A 230的吸光度读数比为1.8,表明没有蛋白质或胍的污染携带。
应用[4][5]
PureLink Pro 96 Genomic DNA Purification Kit可用于转基因食品DNA提取及寡核苷酸芯片检测技术的研究:
目前国内外很多学者在积极探索、深入研究各种高效的转基因食品DNA提取方法。针对转基因食品的不同加工程度,构建和优化了各种加工程度的食品DNA的提取方法。首先,对于转基因农产品,采用Chelex-100法快速提取转基因农产品DNA,Chelex-100是一种由苯乙烯和苯二乙烯共聚体组成的化学离子螯合树脂,其悬液在碱性环境(pH10~11)和100℃的条件下,可导致细胞破裂,DNA从细胞核中释放,同时Chelex-100能结合许多可能影响下一步分析的非核酸物质。
由于Chelex-100能有效除去非核酸有机物,并且通过结合金属离子,防止DNA降解,具有经济、简便、高效等优点,目前已被广泛用于从微量血液、组织斑块、精斑、骨骼等法医物证检材。比较国标(GB/T19495.3-2004)CTAB-1法和Chelex-100法提取转基因大豆GTS40-3-2DNA浓度和纯度,对检测结果进行统计学分析,结果显示Chelex-100法提取的DNA浓度较国标CTAB-1法高(t浓度=10.424,P浓度=0.000),而纯度较CTAB-1法低(t纯度=12.684,P纯度=0.000),但是作为模板用于PCR扩增,效果与CTAB-1提取方法并无明显差别;对比两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的PCR检测效果,结果未见明显差别;将Chelex-100法应用于其他农产品的DNA提取,效果理想。
其次,对于轻中度加工食品,采用改良传统的CTAB法。CTAB法是提取植物DNA的经典方法,也是文献报道最多的提取转基因食品DNA的方法,但是传统的CTAB法由于操作繁琐,耗时长,试剂组成复杂,酚、氯仿等有机溶剂易造成环境污染等问题,在使用上受到一定的限制。
参考文献
[1]Detecting and genotyping Escherichia coli O157:H7 using multiplexed PCR and nucleic acid microarrays[J].Douglas R Call,Fred J Brockman,Darrell P Chandler.International Journal of Food Microbiology.2001(1)
[2]Degenerate Oligonucleotide Primed–Polymerase Chain Reaction and Capillary Electrophoretic Analysis of Human DNA on Microchip-Based Devices[J].Jing Cheng,Larry C.Waters,Paolo Fortina,Georgi Hvichia,Stephen C.Jacobson,J.Michael Ramsey,Larry J.Kricka,Peter Wilding.Analytical Biochemistry.1998(2)
[3]Integrated Cell Isolation and Polymerase Chain Reaction Analysis Using Silicon Microfilter Chambers[J].Peter Wilding,Larry J.Kricka,Jing Cheng,Gia Hvichia,Mann A.Shoffner,Paolo Fortina.Analytical Biochemistry.1998(2)
[4]金大智.运用实时荧光PCR和DNA芯片技术检测和鉴定食源性致病菌方法的研究[D].辽宁师范大学,2004.
{5]蔡翠霞.转基因食品DNA提取及寡核苷酸芯片检测技术的研究[D].南方医科大学,2012.