磷脂酶A2(PLA2)是一类专用水解甘油磷脂sn-2位酯键的酶家族,其中分泌型亚群(sPLA2)分子量小、以分泌形式进入体液与组织,在炎症介质与细胞因子激活网络中处于扳机样的上游位置,参与局部与全身多系统炎症的放大。翻检大鼠sPLA2的中文研究,会发现同一分析物被读成两种彼此不通约的量,一类读酶活性,一类读蛋白含量。活性测定基于底物水解速率,反映催化能力。含量定量依赖抗体对分子的免疫学识别,反映分子数量。大鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA试剂盒是用于体外定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞培养上清等样本中PL-A2含量的科研工具。

在急性马兜铃酸肾损伤研究中,Wistar大鼠按随机数字表分组,模型组以关木通水煎剂灌胃连续7天,对照组以自来水灌胃,停药后喂养至第14天动态观察。第8天肾小管间质损伤达高峰,血清sPLA2活性用硫显色法检测,与大鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA试剂盒所代表的抗体识别路径不同,这是对催化功能的直接读数,模型组较对照组显著增强,同期肾皮质COX-2蛋白表达上调,尿6-keto-PGF1α与TXB2分别升至对照组的2倍和3倍、二者比值显著降低。除损伤指数外,上述变化在第14天回落[1]。硫显色法读的是催化速率,检测的是血清sPLA2呈激活状态,活性单位检测的是酶是否在起效,不是分子有多少。
含量路线的代表是新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)研究中,48小时龄新生SD大鼠与母鼠分离、改用鼠乳代用品人工喂养,叠加100%氮气缺氧90 s与4℃冷刺激(每天2次、连续3天)复制NEC模型,第3天取回盲部近端肠组织,冰生理盐水漂洗拭干后冰浴匀浆,4℃、10000 r/min离心15 min取上清,采用大鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA试剂盒以双抗体夹心法定量,双缩脲法测定蛋白用于归一,结果以每毫克蛋白中sPLA2含量(pg/mg prot)表示。NEC组与对照组病理评分分别为(3.300±0.850)和(0.450±0.400),肠组织sPLA2含量分别为(1.752±0.483)和(0.669±0.180),差异有统计学意义(P<0.05),且含量与病理评分呈正相关[2]。
两篇研究同指大鼠sPLA2,但一个是活性单位、一个是质量浓度,基质也有差异,前者取血清,后者取组织匀浆,因此跨研究比较绝对数值并无意义,可对比的是其检测原理。另外两种读法也各有盲区,活性测定无法区分是酶分子增多还是单位酶活性升高,免疫定量也无法回答测到的分子是否仍具催化功能。因此选型需要清楚,如果是研究酶的功能状态是否被激活,活性测定对口。若要在匀浆这类复杂基质中拿到可与损伤评分直接做相关的浓度读数,大鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA试剂盒这类双抗体夹心法定量是更对口的工具,其读数在分子数量这一维度,可直接进入回归分析。
文献留下的操作细节值得沿用:取材后尽快处理,冰盐水漂洗、滤纸拭干、冰浴匀浆,4℃低温离心取上清,避免反复冻融。匀浆样品需以蛋白定量归一,pg/mg prot与血清浓度不是同一口径。采样时间窗要统一,肾损伤研究正是靠第8天与第14天两个时点才把动态轮廓读出来。种属应匹配,NEC研究明确选用大鼠sPLA2试剂盒而非借用其他物种试剂。量程要覆盖预期区间,该研究中对照组读数仍明显高于检出下限,相关分析才得以成立。使用大鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA试剂盒时同样建议,同批样本保持匀浆与离心条件一致,标准品与待测样本同批读板,稀释线性先用预实验确认,纵向实验还需留意批间差异对前后时点可比性的影响。
参考文献
[1] 杜晔, 张燕京, 苏涛, 等. 急性马兜铃酸肾损伤大鼠血清分泌型磷脂酶A2的变化[J]. 中华肾脏病杂志, 2009, 25(5): 363-367.
[2] 张晓燕, 吴斌, 刘健, 等. 新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠组织分泌型磷脂酶A2含量变化及意义[J]. 中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2011, 7(1): 17-21.