小鼠子宫颈上皮细胞提取物的应用

2020/10/18 17:56:53

背景[1-4]

小鼠子宫颈上皮细胞分离自子宫颈组织;子宫颈位于子宫下部,近似圆锥体,上端与子宫体相连,下端深入阴道。阴道顶端的穹隆又将子宫颈分为两部分:宫颈突入阴道的部分称宫颈阴道部,在阴道穹隆以上的部分称宫颈阴道上部。宫颈的中央为前后略扁的长梭性管腔,其上端通过宫颈内口与子宫腔相连,其下端通过宫颈外口开口于阴道。内外口之间即宫颈管。宫颈的大小与宫体比例随年龄及内分泌状态等而变化;宫颈壁由黏膜、肌层和外膜组成。

上皮细胞覆盖于身体表面并衬贴于体内空腔器官腔面的细胞。其排列有明显极性,一面朝向身体表面或腔面,称游离面;一面向着深部的结缔组织,称基底面。上皮细胞具有强大的角生和更新能力。上皮组织具有保护、吸收、分泌和排泄等作用。当上皮细胞受损时,则影响机体的防御功能。小鼠子宫颈上皮细胞分离自子宫颈组织;子宫颈为子宫的最下部最细部,伸入阴道,呈圆柱状的部分是子宫颈。

子宫颈又可分为上、下两部,下部突入阴道称子宫颈阴道部,上部则称子宫颈阴道上部。子宫颈的内腔呈梭形,叫子宫颈管,其上口叫子宫颈管内口,与子宫体腔相通;下口叫子宫颈管外口,开口于阴道。宫颈管内含有大量分泌腺。这些分泌腺在月经周期的各个阶段,分泌不同的粘液,排卵前夕和排卵期,宫颈分泌物稀薄;在其他时期,分泌物常常粘稠,粘稠的分泌物常常形成粘液栓而起封闭宫颈管外口的自洁作用。排卵期子宫颈粘液稀薄有利于精子通过和成活。

体外培养的小鼠子宫颈上皮细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。小鼠子宫颈上皮细胞采用先胶原酶消化、后组织贴块法,结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10^5cells/瓶;细胞经Cytokeratin-19/PCK免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

应用[4][5]

小鼠子宫颈上皮细胞提取物可用于水通道蛋白对子宫颈癌细胞系的迁移及局部浸润潜能的影响研究:

目前,手术、放化疗是宫颈癌的主要治疗手段。对于早期宫颈癌患者,手术治疗是较为有效的治疗方法;但是中晚期宫颈癌患者失去手术机会,不得不采用放化疗方法治疗,放化疗的副作用常常使治疗难以继续进行。浸润和转移是宫颈癌疗效差、预后不良的重要因素,因此深入研究宫颈癌浸润、转移的机制对其临床治疗具有重要的意义。

为满足快速增殖、分裂和侵袭转移的需要,肿瘤细胞内一系列酶的活性和表达会发生改变,细胞基本结构成分如蛋白质、脂类和核酸的合成加强。癌细胞所有生命活动都离不开水的微环境和参与,它比正常细胞更需要水分子的快速跨膜转运,同时癌细胞向周围基质浸润和进出血管(淋巴管)时需要其体积和细胞形态的改变。水通道蛋白(AQPs)是一组能选择性跨细胞质膜由渗透压驱动转运水分子的小而完整的糖蛋白,迄今为止共发现有13个成员(AQP0-12)。源于基因敲除小鼠的大量研究提示AQPs参与的生理病理功能有尿的浓缩、外分泌腺分泌、脑水肿、神经信号传导、皮肤水分增加、脂肪代谢等。

近期对AQPs的一些研究提示AQPs参与细胞的迁移和增殖,可能增强肿瘤的局部侵袭力和通过血管(淋巴管)转移的能力。本研究应用荧光实时定量PCR(Real-Time PCR,RT-PCR)、免疫荧光及免疫组织化学初步筛选出在子宫颈癌中特异表达的AQP1、AQP3、AQP8三个亚型,选取AQP8基因作为目的基因,然后通过荧光蛋白标记的慢病毒载体转染入SiHa细胞基因组内,分别从AQP8基因过表达和表达沉默两方面,探讨AQP8基因对SiHa细胞迁移、增殖、基质贴附及局部浸润的影响。

目的:筛选在子宫颈癌中特异表达的AQP亚型,探讨特异AQP亚型对子宫颈癌细胞体外、体内迁移增殖、基质贴附及局部浸润的影响。通过水通透性实验比较四种人子宫颈癌细胞系SiHa、HeLa、Caski、ME-180水通透性差异,从中选择水通透性低的细胞系作为实验用细胞系,应用RT-PCR、免疫荧光筛选子宫颈癌细胞系中特异表达的AQP亚型,进一步通过免疫组化筛选子宫颈癌组织中特异表达的AQP亚型。

参考文献

[1]5-Aza-dC和放疗对宫颈癌细胞系的增殖抑制作用与P16、MGMT基因表达的关系探讨[D].陈观娣.南方医科大学2018

[2]宫颈癌细胞系RRM1表达水平与细胞对吉西他滨敏感性的相关研究[D].焦澜舟.中国协和医科大学2009

[3]水通道蛋白在维吾尔族妇女子宫颈癌中的差异表达及其与预后关系的研究[D].陈锐.新疆医科大学2012

[4]利用siRNA沉默PCNA研究对宫颈癌生长的影响[D].黄浩.华中科技大学2009

[5]史永华.水通道蛋白对子宫颈癌细胞系的迁移及局部浸润潜能的影响研究[D].新疆医科大学,2012.

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