背景[1-5]
大鼠卵巢颗粒细胞提取物是从大鼠原代卵巢颗粒细胞提取的，大鼠原代卵巢颗粒细胞从正常大鼠卵巢组织制备。可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。大鼠卵巢颗粒细胞分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育（右侧已退化），呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。
卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经。卵巢颗粒细胞是卵巢的主要功能细胞，其增殖与分化直接影响着卵泡的生长启动、发育、排卵、黄体形成以及甾体激素分泌等卵巢功能活动。
卵巢颗粒细胞是卵泡内的细胞群，也是主要的功能细胞，卵泡发育的显著标志之一就是颗粒细胞迅速生长及增殖，而成年动物的卵泡闭锁主要是由颗粒细胞凋亡引起，尤其在卵泡发育后期，此外，颗粒细胞还与卵泡膜细胞共同完成卵巢激素的合成，维持着有利于卵母细胞生长和成熟的微环境。细胞形状呈圆形或椭圆形。
应用[6][7]
大鼠卵巢颗粒细胞提取物可用于Reg IV在PCOS模型大鼠卵巢中的表达及对颗粒细胞作用机制的研究：
多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是女性最常见的内分泌紊乱性疾病，临床特征为持续无排卵、高雄激素血症以及超声下见卵巢呈多囊样改变，其发生糖尿病、高血压、心血管疾病及子宫内膜癌的风险增加。在闭经患者中约占30%，在月经稀少和排卵功能障碍性不孕患者中可高达90%。目前，该病机制仍不是很清楚。有研究认为卵泡生长发育异常可能是引起PCOS不排卵及临床内分泌改变的病理基础，而内在性的卵泡发育异常可能与卵巢颗粒细胞的凋亡调控失常有关。
此外，卵巢颗粒细胞的增殖和凋亡与卵泡的发育成熟及闭锁密切相关，多种调控因子参与颗粒细胞增殖和凋亡的过程。再生基因Reg家族，属钙依赖性凝集素超家族(calcium-dependentlectin superfamily)，代表一组小分子、多功能的分泌性蛋白。1984年由法国人Keim首先在急性胰腺炎的大鼠胰液中发现，其功能相当于急性反应蛋白和胰腺β细胞、神经细胞以及消化系统上皮细胞等的抗凋亡因子或生长因子。
根据Reg基因编码蛋白的一级结构，Reg家族可分为4个亚型：I、II、III和IV。主要参与组织损伤、炎症及糖尿病和肿瘤的发生。Reg IV基因作为Reg基因家族的新成员，由Hanupee等于2001年在研究炎症性肠病时首次分离筛选鉴定并报道。该基因定位于1号染色体(1q12-q21)，由17496个碱基对构成，包含6个外显子和5个内含子。其蛋白相对分子质量约17kDa。大量研究表明Reg IV参与细胞的增殖、凋亡、再生和炎性、化生反应，并与肿瘤的发生、发展密切相关。然而对于Reg IV的生物学功能的研究还不是很透彻，它是否在卵巢中表达并参与卵泡的发育以及颗粒细胞的凋亡和增殖等都未见任何报导。
因此，本研究首先通过免疫组织化学染色、定量RT-PCR以及Western blot分析观察Reg IV在正常和PCOS模型大鼠卵巢的表达情况，以探讨Reg IV是否与PCOS的发病相关。此外，Reg IV触发的信号通路、靶点、与其它级联的交叉以及与其它因子的相互作用和影响仍不清楚，所以我们接着采用大鼠卵巢颗粒细胞体外培养的方法，研究外源性的Reg IV蛋白对颗粒细胞增殖与凋亡的影响，并应用小分子RNA干扰技术抑制Reg IV表达，进一步探讨Reg IV对EGFR/Akt及IGF-I/Akt信号通路及凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响。
参考文献
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[3]Coordinated expression of REG4 and aldehyde dehydrogenase 1 regulating tumourigenic capacity of diffuse‐type gastric carcinoma‐initiating cells is inhibited by TGF‐β[J].Yoko Katsuno,Shogo Ehata,Masakazu Yashiro,Kazuyoshi Yanagihara,Kosei Hirakawa,Kohei Miyazono.J.Pathol..2012(3)
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[6]REG4 acts as a mitogenic,motility and pro-invasive factor for coloncancer cells[J].Louisa Rafa,Anne-Frédérique Dessein,Louise Devisme,David Buob,Stéphanie Truant,Nicole Porchet,Guillemette Huet,Marie-Pierre Buisine,Thécla Lesuffleur.International Journal of Oncology.2010(3)
[7]杜芳.Reg IV在PCOS模型大鼠卵巢中的表达及对颗粒细胞作用机制的初步探讨[D].重庆医科大学,2013.