ELISA数据中,回收率受多种因素影响,主要包括:
交叉反应性:当抗体识别并结合与目标分析物相似的分子时,会导致假阳性信号,从而影响回收率。
抗体亲和力:捕获抗体和检测抗体对目标分析物的亲和力至关重要。高亲和力抗体能更有效地捕获目标分子,从而提高回收率。
样品制备:样本处理不当(如未充分离心去除杂质、反复冻融导致蛋白降解)会直接影响目标分子的回收效率。
基质干扰:样本中的高蛋白、盐分、去污剂或有机溶剂等成分可能干扰抗体结合,导致回收率偏离理想范围(80%-120%)。
实验操作:加样体积不准确(需≤原样本体积10%)、孵育温度不均、洗涤不彻底等操作误差也会引入偏差。
为确保数据可靠,建议使用经过严格验证的试剂盒,并严格按照标准操作流程进行加标回收实验。