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上海优宁维生物科技股份有限公司

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结肠炎模型构建全攻略

发布日期:2025/12/4 11:21:19发布人:上海优宁维生物科技股份有限公司

炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种主要累及消化系统的慢性炎症性肠道疾病,其中克罗恩病(Crohn′s disease,CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是主要类型。DSS(硫酸葡聚糖钠盐)诱导结肠炎是全球应用最广泛的炎症性肠病(IBD)研究模型,其核心优势在于高度模拟人类溃疡性结肠炎(UC)、精准复制临床病理特征(结肠缩短、隐窝损伤、杯状细胞减少、血便)、操作简便且重复性好。体内实验,动物通过饮水给药(3-5% DSS,5-7天),无需手术或基因改造。体外实验,从UC患者的结肠手术样本中分离成纤维细胞,再重编程为iPSCs后定向分化为溃疡性结肠炎类器官iHUCOs。

 

一、体内溃疡性结肠炎(UC)模型

1、此模型通过DSS破坏肠道屏障并诱发炎症,结合IGF2干预验证其保护作用,适用于研究溃疡性结肠炎的机制及药物筛选[1]

(1) 实验动物

野生型 C57BL/6 J 小鼠

(2) UC造模方法

① 小鼠饲养于光照(12小时 光/暗循环)和温度(22±0.5℃)可控的房间内,自由自由饮食和饮水;

② 经过1周的适应期后,小鼠通过自由饮用含 5%(w/v)DSS 的水溶液(abs9192)7 天以建立结肠炎模型,对照组饮用无菌水。

(3) 评价指标

结肠缩短 + 体重下降 + DAI评分≥3分;

组织学验证:炎症浸润、隐窝损伤、杯状细胞减少;

分子标志物:MPO活性升高、促炎因子(IL-1β/TNF-α/IL-6)上调;

伴随现象:IGF2表达下调、肠道屏障破坏、cGAS-Sting通路激活。

 

 

2、此模型通过多维度指标(肠道病理、行为学、分子机制)综合评估UC及其神经精神并发症,适合研究肠-脑互作及潜在治疗靶点[2]

(1) 实验动物

8周龄雄性C57BL/6J小鼠

(2) UC造模方法

① 小鼠饲养于光照(12小时 光/暗循环)和温度(22±2℃)可控的房间内,自由饮食和饮水。

② 经过1周的适应期后,小鼠通过自由饮用含 4%(w/v)DSS的水溶液(abs9192)7 天以建立结肠炎模型,对照组设置如下:

对照组(Ctrl+NS):饮用无菌水,腹腔注射生理盐水(NS)。

模型组(DSS+NS):饮用4% DSS水,腹腔注射NS。

治疗组(DSS+Bet):饮用4% DSS水,腹腔注射甜菜碱(abs47001024,600 mg/kg/天)。

(3) 评价指标

结肠病理学改变:炎症评分升高、杯状细胞减少、结肠缩短。

行为学异常:FST/TST静止时间延长,LDBT/OFT探索行为减少。

分子验证:结肠M1巨噬细胞标志物上调,M2下调。海马DNA损伤、线粒体功能障碍及cGAS-STING通路激活。

 

 

二、体外人溃疡性结肠炎类器官(iHUCOs)模型[3]

1. 细胞来源

从溃疡性结肠炎(UC)患者的手术标本中分离结肠成纤维细胞。

2. UC造模方法

(1) 重编程为iPSCs

使用CytoTune-IPS重编程试剂盒将UC患者的成纤维细胞转化为诱导多能干细胞(iPSCs)。

(2) 分化为肠道类器官

内胚层分化:iPSCs在含有Activin A(abs05801)的培养基中分化为定型内胚层(DE),持续3天。

肠道球体形成:DE在含有FGF4(abs06269)和CHIR99021(abs810052)的培养基中分化为肠道球体(SPH),持续4天。

类器官培养:球体在Matrigel(abs9495)中培养21天,使用含R-Spondin 1(abs90189)、Noggin(abs90191)等因子的肠道生长培养基,形成诱导人UC类器官(iHUCOs)。

(3) 模型特点

包含上皮和间质细胞区室,模拟UC的复杂微环境。保留了患者特异性的遗传背景和病理特征。

3. 评价指标

iHUCOs的成功评价基于其病理特征复现能力(组织学、分子标志物)、功能模拟(屏障缺陷、炎症通路)及治疗响应性(药物干预效果)。

组织学与形态学:复现UC患者上皮结构异常(如复层化);杯状细胞减少,Ki67增殖标志物显著升高。

屏障功能异常:黏附连接:E-cadherin/β-catenin定位于细胞膜(健康人来源对照类器官iHNOs分布于胞质和核内);紧密连接:CLDN1表达降低,荧光右旋糖酐证实通透性增加。

分子机制:炎症激活:CXCL8/CXCR1轴和RhoA信号过表达;转录组:富集炎症(TNF/IFN-γ)、纤维化(COL1A1/3A1)及免疫浸润(B/NK细胞)通路。

体内验证:移植后保留UC表型;Repertaxin(abs811153,CXCR1抑制剂)可改善屏障功能并减少炎症。

 

 

结肠炎模型化学诱导剂

货号

产品名称

 规格

硫酸葡聚糖钠盐(分子量:3.6-5万)

5g

 

结肠炎阳性对照药

药物类型

货号

产品名称

 规格

氨基水盐酸类

5-氨基水杨酸(5-Aminosalicylic acid)

5 g

柳氮磺吡啶(Sulfasalazine)

1 g

奥沙拉秦钠(Olsalazine disodium )

100 mg

肾上腺素皮质激素类

醋酸地塞美松(Dexamethasone acetate)

500 mg

醋酸氢化可的松(Hydrocortisone acetate)

100 mg

醋酸泼尼松龙(Prednisolone acetate )

500 mg

免疫抑制剂

硫唑嘌呤(Azathioprine)

500 mg

6-硫鸟嘌呤(6-Thioguanine)

500 mg

环孢素A(Cyclosporin A )

50 mg

 

具有结肠炎治疗潜力的中药(植物提取物)

货号

产品名称

 规格

汉黄芩素

20 mg

甜菜碱

20 mg

原花青素

20 mg

氯化矢车菊素

20 mg

原花青素B1

20 mg

原花青素B2

20 mg

雷公藤红素

20 mg

(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯

20 mg

异甘草素

20 mg

毛蕊异黄酮

20 mg

水飞蓟宾

20 mg

黄芩苷

20 mg

金丝桃甙

20 mg

黄芪多糖

20 mg

姜黄素

20 mg

迷迭香酸

20 mg

小檗碱

20 mg

二氢杨梅素

20 mg

大黄酸

20 mg

氧化苦参碱

20 mg

丹参酮 IIA

20 mg

 

结肠炎相关激动剂抑制剂

货号

产品名称

 靶点

IWR-1 endo

Wnt/β-catenin

IWP-2

Wnt/β-catenin

ICG-001

Wnt/β-catenin

Wnt Agonist 1

Wnt/β-catenin

XAV939

Wnt/β-catenin

NCB-0846

Wnt/β-catenin

2-Methoxyestradiol

CYP24A1

Ketoconazole

CYP24A1

Clotrimazole

CYP24A1

Genistein

CYP24A1

vitamin D2

CYP24A1

BI2536

PLK1

Volasertib

PLK1

Rigosertib

PLK1

MLN0905

PLK1

HMN-214

PLK1

 

肠类器官培养试剂

货号

品名

规格

人多能干细胞培养基

500ml

人多能干细胞消化液

100mL

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液(100×,200mM)

100mL

ES/iPS细胞冻存液

100mL

即用型基质胶

100mL

RPMI 1640

500mL

双抗

100mL

Activin A

10ug

FGF4

50ug

WNT3a

50ug

基质胶(低因子、无酚红)

1.5ml*8

透析胎牛血清

500mL

人正常肠类器官培养试剂盒

1kit

Y-27632

5mg

A 83-01

5mg

CHIR-99021

5mg

SB202190(FHPI)

5mg

Nicotinamide

50mg

 

Absin产品线:

爆款产品:十大试剂盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化检测、残留检测、多因子检测);细胞培养(类器官试剂盒+基质胶,胎牛血清+培养添加剂+细胞因子)、分化试剂盒;分子(mRNA合成服务+提取试剂盒);化合物大包装;辅助试剂、耗材/仪器、定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

特色产品:鸡胚提取物CEE、B27、N2、霍乱毒素B亚单位CTB、牛脑垂体提取物BPE、百日咳毒素PTX、重组人胰岛素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

 

参考文献:

[1]Chen L, Zhong XL, Cao WY, et al. IGF2/IGF2R/Sting signaling as a therapeutic target in DSS-induced ulcerative colitis. Eur J Pharmacol. 2023;960:176122.

[2]Liu W, Zhong X, Yi Y, et al. Prophylactic Effects of Betaine on Depression and Anxiety Behaviors in Mice with Dextran Sulfate Sodium-Induced Colitis. J Agric Food Chem. 2024;72(38):21041-21051. 

[3]Sarvestani SK, Signs S, Hu B, et al. Induced organoids derived from patients with ulcerative colitis recapitulate colitic reactivity. Nat Commun. 2021;12(1):262. Published 2021 Jan 11.

 


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