玉米赤霉烯酮快速检测试剂盒说明书
(货号：Ounuo98003)
一、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物玉米赤霉烯酮将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗玉米赤霉烯酮抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物玉米赤霉烯酮的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物玉米赤霉烯酮的含量。
二、试剂盒特性
1. 灵 敏 度： 0.1ppb
2. 孵育温度： 25℃
3. 孵育时间： 30min～15min
4. 样本检测下限
饲 料 10ppb
大米、玉米、花生 5ppb
5. 交叉反应率
玉米赤霉烯酮 99%
6. 样本回收率
饲料、大米、玉米、花生 100±30%
三、样品处理
（a）饲料样本处理方法：
1. 取1.0±0.05g研碎的样本于50ml离心管中；加入5ml样本提取液；
2. 充分振荡3min（或手摇5min以上），20℃ 4000r/min以上离心10min；
3. 取上清50μl，加入950μl样本复溶液，充分振荡混匀；
4. 取50μl用于分析。
样本稀释倍数：100倍
注：若测出样本中待测物含量已超出曲线范围，可把样本再做多倍稀释后进行检测（例如：取50μl上清液于新的离心管中，加入1450μl去离子水，稀释倍数150倍）。
（b）玉米、大米样本处理方法：
5. 取1.0±0.05g研碎的样本于50ml离心管中；加入5ml样本提取液；
6. 充分振荡3min（或手摇5min以上），20℃ 4000r/min以上离心10min；
7. 取上清100μl，加入900μl样本复溶液，充分振荡混匀；
8. 取50μl用于分析。
样本稀释倍数：50倍
注：若测出样本中待测物含量已超出曲线范围，可把样本再做多倍稀释后进行检测（例如：取50μl上清液于新的离心管中，加入950μl样本复溶液，稀释倍数100倍）。
（c）花生样本处理方法：
1. 取1.0±0.05g研碎的花生样本于50ml离心管中；加入5ml样本提取液，再加入4ml正己烷；
2. 充分振荡3min（或手摇5min以上），20℃ 4000r/min以上离心10min；
3. 去掉上清，取中间层液体100μl，加入900μl样本复溶液，充分振荡混匀；
4. 取50μl用于分析。
样本稀释倍数：50倍
注：若测出样本中待测物含量已超出曲线范围，可把样本再做多倍稀释后进行检测（例如：取50μl中间层液体于新的离心管中，加入950μl样本复溶液，稀释倍数100倍）。
四、 酶标免疫分析程序:
1、 从2～8℃冷藏环境中取出所需试剂，室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、 取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、 配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。
4、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、 加标准品/样本50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50μl/孔，再加入50μl/孔的抗体工作液，用盖板膜盖板，轻轻振荡混匀，25℃环境反应30min。
6、 将孔内液体甩干，用稀释后的洗涤液250μl/孔洗板4～5次，每次间隔15～30秒，用吸水纸拍干（拍干后未清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
7、 显色：加入底物A液50μl/孔，再加入底物B液50μl/孔，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色15min。
8、 测定：加入终止液50μl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，5min内读数），测定每孔OD值。
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