谷胱甘肽还原酶(GR)测定试剂盒/微量法/96S 新品

谷胱甘肽还原酶(GR)测定试剂盒/微量法/96S

测定意义：

GR 是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中GR 被 TrxR 取代）。GR 催化 NADPH 还原 GSSG 生成 GSH ，有助于维持体内 GSH/GSSG 比值。GR 在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外 GR 还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。

测定原理：

GR 能催化 NADPH 还原 GSSG 再生 GSH ，同时 NADPH 脱氢生成 NADP+；NADPH 在 340 nm有特征吸收峰，相反 NADP+在该波长无吸收峰；通过测定 340 nm 吸光度下降速率来测定 NADPH 脱氢速率，从而计算 GR 活性。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、和蒸馏水。

操作步骤：
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min ，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一置于 25℃（普通物质）或者 37℃（哺乳动物）中预热 30min。

3. 测定管：取微量石英比色皿或 96 孔板，依次加入 10μL 试剂三，20μL 试剂二，150μL 试剂一，20μL 上清液，混匀，于 340nm 迅速测定初始吸光度和 180 s 吸光度，记为 A 测 1 和 A 测 2，△A 测定管=A 测 1 - A 测 2。。

注 意：
1. 加完上清液后必须迅速混匀测定，保证准确测出初始反应速度；

2. 当出现初始 180s 内吸光值不稳定时，可以适当延长反应时间，选取相对稳定的时间段内吸光值变化值；

3. 当所测△A 测定管的值在零点附近徘徊时，可能原因：（1）样本 GR 酶活性低，建议浓缩样本后再进行测定；（2）样本 GR 酶活性过高，吸光值变化区间过小无法准确测出，建议样本稀释 2~5 倍后再进行测定)。