谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
GSH-Px 是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px 不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与 ROS 反应,生成氧化型谷胱甘肽 GSSG ,从而保护生物膜免受 ROS 的损害,维持细胞的正常功能;而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。
测定原理:
GSH-Px 催化有机过氧化物氧化 GSH ,产生 GSSG;谷胱甘肽还原酶(GR)催化 NADPH 还原GSSG,再生 GSH ,同时 NADPH 氧化生成 NADP+;NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰,而 NADP+没有;通过测定 340 nm 光吸收减少速率来计算 GSH-Px 活性。
自备仪器和用品:
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 石英比色皿和蒸馏水。
测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min ,调节波长到 340 nm,蒸馏水调零。
2. 混合试剂在 25℃或者 37℃(哺乳动物)水浴中预热 30min。
3. 混合试剂配制:临用前,在试剂二中加入试剂一 40 mL,充分震荡溶解后加入全部试剂三,混匀 。(注意:必须现配现用,当天使用完)
4. 试剂四的稀释: 吸取 21.5μL 试剂四,加入 5mL 水充分混匀,临用前配制,配制好的试剂当天使用。
5. 测定管:依次在 1mL 石英比色皿中加入 100μL 上清液、800μL 预热的混合试剂、100μL 稀释后的试剂四,迅速混匀后于 340nm 处测定第 30 s 和第 210s 的吸光值,分别记为 A1 和 A2 ,△A= A1- A2。
注 意:
(1)样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力;
(2)混合试剂和底物液须临用前配制,配完后置于冰上,当天使用完;
(3)测定过程操作须迅速;
(4)细胞中 GSH-Px 活性测定时,细胞数目须在 300 万-500 万之间,细胞中 GSH-Px 的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞。
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