线粒体呼吸链复合体Ⅱ/琥珀酸辅酶Q还原酶测定试剂盒/分光光度法/24样
测定意义:
线粒体复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶 Q 还原酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,催化琥珀酸氧化生成延胡索酸,同时辅基 FAD 还原为 FADH2,后者进一步还原氧化型辅酶 Q 生成还原型辅酶 Q,是呼吸电子传递链的支路。
测定原理:
复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶 Q 可进一步还原 2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在 605nm 有特征吸收峰,通过检测 2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 605nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
(1)工作液的配制:临用前把试剂五和试剂六转移到试剂四中混合溶解,置于37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)孵育 5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
(2)在 1mL 玻璃比色皿中加入 40μL 样本、100μL 试剂七和 800 μL 工作液,立即混匀,记录 605nm 处初始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2 ,计算 ΔA=A1-A2。
注 意:
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
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