线粒体呼吸链复合体Ⅲ/CoQ细胞色素C还原酶测定试剂盒/分光光度法/24样
测定意义:
线粒体复合体Ⅲ(EC 1.10.2.2 )又称 CoQ-细胞色素 C 还原酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分,负责把还原型 CoQ 的氢传递给细胞色素C ,生成还原型细胞色素 C。
测定原理:
与氧化型细胞色素 C 不同,还原型细胞色素 C 在 550nm 有特征光吸收,因此 550nm 光吸收增加速率能够反映线粒体复合体Ⅲ酶活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 550nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
(1)工作液的配制:临用前把试剂五转移到试剂四中混合溶解,置于37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)孵育 5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
(2)在 1mL 玻璃比色皿中加入 40μL 样本、100μL 试剂六和 800 μL 工作液,立即混匀,记录 550nm 处初始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2 ,计算 ΔA=A2-A1。
注 意:
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
上海酶联生物科技有限公司
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