人肾癌细胞+luc;A498-LUC-PURO
产品信息：
这是一份关于A498-LUC-PURO 人肾癌细胞（荧光素酶标记）的详细说明及标准培养操作指南。
A498 是肾透明细胞癌研究的重要模型，而 A498-LUC-PURO 是在其基础上通过基因工程手段稳定表达了荧光素酶（Luciferase, LUC）和嘌呤霉素（Puromycin）抗性基因的改造株。该细胞系结合了 A498 细胞的生物学特性和 LUC 的示踪能力，广泛应用于肾癌的活体成像、药物疗效评估及转移机制研究。
细胞基本信息
亲本来源：A498 (人肾透明细胞癌细胞)
种属来源：人（Homo sapiens）
组织来源：肾脏（Kidney）
供体信息：52岁女性，肾癌患者
细胞形态：上皮细胞样
生长特性：贴壁生长
产品名称 | 人肾癌细胞+luc;A498-LUC-PURO | 英文名称 | A498-LUC-PURO：A498LUCPURO |
货号 | AXB10691 | 生长特性 | 贴壁生长 |
标记基因：
LUC：荧光素酶，用于生物发光成像（需底物荧光素）。
PURO：嘌呤霉素抗性，用于筛选和维持质粒。
培养基：MEM + 10% FBS
细胞特性与应用
特征维度 详细描述
背景简介 该细胞系由 Aaronson S 建立，源自一位 52 岁女性肾癌患者的肾组织。
荧光特性 该细胞通常不表达自发荧光蛋白（如 GFP），仅表达荧光素酶。因此在普通显微镜下无自发荧光，需通过生物发光成像（IVIS）检测。
抗性维持 培养基中通常需要添加 Puromycin (嘌呤霉素) 以维持荧光素酶标记的稳定表达。
主要应用 1. 肾癌肿瘤生长及药物干预的活体成像研究。
2. 肾癌转移及定植机制研究。
3. 抗肿瘤药物的体内/体外药效评价。
推荐培养体系
基础培养基：MEM (Minimum Essential Medium)
血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)
双抗添加：1% 青霉素-链霉素 (P/S)
筛选压力：Puromycin (嘌呤霉素)（通常添加浓度为 1.0 μg/mL，具体需根据实验室条件滴定）
培养环境：
温度：37℃
气体环境：95% 空气 + 5% CO
湿度：维持培养箱内湿度 >90%。
详细培养操作指南
1. 细胞复苏 (Thawing)
预热：将水浴锅调至 37℃，预热完全培养基。
解冻：从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃ 水浴中，1-2 分钟内快速摇晃融化。
转移：用 75% 酒精擦拭冻存管外壁消毒，转入超净台。
稀释：将细胞悬液缓慢加入含有 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中（稀释 DMSO 毒性）。
离心：1000 rpm (约 250g) 离心 3-5 分钟。
接种：弃上清，加入新鲜完全培养基（含 Puromycin）重悬，接种至 T25 培养瓶中，放入培养箱静置培养。
2. 细胞传代 (Passage)
A498-LUC-PURO 为贴壁细胞。
观察：当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代。
清洗：弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液润洗细胞 1 次。
消化：加入适量消化液（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA，约 1-2 mL），37℃ 培养箱消化 1-3 分钟。
镜下观察：显微镜下观察，待细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台。
终止：加入含血清的完全培养基终止消化，轻轻吹打混匀。
离心：1000 rpm 离心 4-5 分钟。
重悬与分瓶：弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 到 1:3 的比例进行分瓶传代。
3. 细胞冻存 (Freezing)
状态选择：待细胞生长状态良好时进行冻存。
消化：弃去培养基，加入少量胰酶消化，待细胞变圆脱落。
收集：加入含血清的培养基终止消化，混匀后转移至离心管。
离心：1000 rpm 离心 5-10 分钟，弃上清。
重悬：加入配置好的冻存液（90% 完全培养基 + 10% DMSO）重悬细胞。
分装：转移至冻存管中，放入程序降温盒（-80℃ 过夜），随后转入液氮罐长期保存。
关键注意事项
贴壁特性：A498 细胞贴壁较为牢固，消化时间可能需要适当延长，但需避免消化过度损伤细胞。
运输脱落：由于运输震荡，部分细胞可能会从瓶壁脱落。若收到细胞发现瓶底有漂浮细胞团，属正常现象。请将瓶内液体转移至离心管，离心收集细胞，弃上清，用 PBS 清洗一次，再用完全培养基重悬后接种回培养瓶中。
抗性维持：为了维持 LUC 标记的稳定性，建议在培养基中持续添加 Puromycin。若长期不加压，荧光信号可能会随传代次数增加而减弱。
无菌操作：所有操作必须在生物安全柜内严格无菌操作。
支原体检测：建议定期检测支原体，确保细胞无污染。
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细胞具体特点如下：
环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。
生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。
传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。
敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。
应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。
关键字： A498-LUC-PURO;人肾癌细胞+luc;贴壁细胞;
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