商品属性
产品名称 | 单宁含量测试盒 | 产品货号 | BH-961177 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 产品分类 | 氧化与抗氧化系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
单宁（Tannins），又称植物多酚，是植物重要的次生代谢产物，具有广泛的生物学功能和应用价值：植物生理功能：参与植物生长发育，调节激素平衡，增强植物抗逆性食品领域：影响食品的色泽、口感和稳定性，赋予食品涩味和抗氧化性医学领域：具有止血、抗菌、抗炎、降血脂、抗肿瘤等多种生理活性环境领域：对重金属有螯合作用，可用于土壤修复和污水处理工业应用：用于皮革鞣制、木材防腐、墨水生产等领域
测定原理
采用磷钼酸比色法，在碱性环境下，单宁分子中的酚羟基与磷钼酸反应，生成蓝色化合物，在760nm处有最大吸收峰，吸光度与单宁含量成正比： 单宁+磷钼酸→碱性环境蓝色化合物(760nm)单宁+磷钼酸碱性环境蓝色化合物(760nm)
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂一 液体10mL×1瓶 含碳酸钠缓冲液（pH≥10），提供碱性反应环境
试剂二 液体8mL×1瓶 含5%磷钼酸溶液，与单宁反应生成蓝色化合物
标准品 粉剂×1支 含10mg单宁酸标准品，用于建立标准曲线
提取液 液体100mL×1瓶 含60%乙醇溶液，用于植物样本提取
自备仪器与试剂
必备仪器
分光光度法：可见分光光度计（760nm检测通道）、1mL玻璃比色皿
酶标仪法：酶标仪（760nm检测通道）、96孔板
HPLC法：高效液相色谱仪、紫外检测器（275nm检测通道）
通用：低温离心机（≥10000g）、恒温水浴锅、可调式移液器、研钵/组织匀浆器
必备耗材
离心管（1.5mL、10mL）、一次性吸头、手术剪/镊子
自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、60%乙醇溶液
样本前处理方法
植物组织样本取新鲜植物组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分称取约0.1g组织，加入1mL 60%乙醇，冰浴匀浆80℃水浴提取30min，期间振荡2-3次10000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测若单宁含量过高，可用60%乙醇稀释1-10倍后测定
果实/蔬菜样本取新鲜果实/蔬菜，去皮去核，切成小块称取约0.5g样本，加入5mL 60%乙醇，冰浴匀浆60℃超声提取30min，12000rpm 25℃离心10min取上清液置冰上待测，可直接检测或根据需要稀释
食品/饮料样本液态样本：如红酒、果汁，可直接测定，或用60%乙醇稀释1-5倍固态样本：磨碎后加入5-10倍体积的60%乙醇，搅拌均匀后过滤，取上清测定提取物：将提取物配制成一定浓度（如5mg/mL）的溶液后测定
测定操作步骤
标准曲线建立标准品配制：将10mg单宁酸标准品加入1mL蒸馏水，配制成10mg/mL标准液梯度稀释：将10mg/mL标准液用60%乙醇稀释成0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL的标准系列显色反应：取比色管，加入标准品溶液0.1mL + 试剂一0.5mL，涡旋混匀，室温静置5min加入试剂二：向各管加入试剂二0.1mL，涡旋混匀，室温静置30min吸光度测定：在760nm波长下测定各管吸光度，以单宁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线
样本测定样本处理：取0.1mL样本提取液，加入试剂一0.5mL，涡旋混匀，室温静置5min加入试剂二：向各管加入试剂二0.1mL，涡旋混匀，室温静置30min空白对照：取0.1mL 60%乙醇，按上述步骤操作，作为空白管吸光度测定：在760nm波长下测定样本管和空白管的吸光度（A样、A空）
结果计算方法
单位定义
mg/g鲜重：每克植物组织鲜重中单宁的含量
mg/g干重：每克植物组织干重中单宁的含量
mg/mL：每毫升样本中单宁的含量
计算公式
单宁含量(mg/g鲜重)=(A样−A空)×C标×V总(A标−A空标)×W单宁含量(mg/g鲜重)=(A标−A空标)×W(A样−A空)×C标×V总
A样-A空：样本扣除空白后的吸光度值
C标：标准品浓度（mg/mL）
V总：样本提取液总体积（mL）
A标-A空标：标准品扣除空白后的吸光度值
W：样本质量（g）
简化公式
按鲜重计算：单宁（mg/g鲜重）= (A样-A空)÷(A标-A空标)×C标×V总÷W
按干重计算：单宁（mg/g干重）= (A样-A空)÷(A标-A空标)×C标×V总÷W干重
性能指标
指标 要求
线性范围 0~1mg/mL，线性相关系数r≥0.995
最低检测限 ≤0.01mg/mL
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 CV≤8.0%
稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免单宁被氧化或降解；-80℃可保存1个月
提取过程中需避免光照和高温，防止单宁分解
样本处理过程中需避免接触金属器具，防止单宁与金属离子络合
试剂使用：
磷钼酸溶液需现配现用，或按说明书要求稀释
碳酸钠溶液需密闭保存，避免吸收空气中的二氧化碳而失效
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
测定过程：
反应时间需严格控制在30min，避免显色过度或不足
反应需在避光条件下进行，防止蓝色化合物分解
若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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