检验原理

本试剂盒采用SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术,针对停乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的基因高度保守区域设计特异性引物,通过荧光信号实时监测核酸扩增过程,实现定性及定量检测。
产品名称 | 停乳链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Streptococcus dysgalactiae Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4400 |

产品特点

高灵敏度:优化的引物设计,可检测低拷贝数目标基因。
高特异性:引物针对停乳链球菌特有序列,避免交叉反应。
即开即用:用户仅需提供待测DNA模板,操作简便。
双重检测模式:支持定性和定量分析,定量线性范围达5个数量级。
内置对照:提供阳性对照,便于排除假阴性干扰。
操作流程

样本准备
临床样本(如血液、分泌物、组织等):
血液样本:采集2 mL静脉血,EDTA抗凝,混匀后提取DNA。
病灶样本:无菌采集渗出物或脓液,提取核酸。
食品/环境样本:按微生物检测标准预处理后提取DNA。
试剂配制
解冻与混匀:
从-20℃取出试剂,冰上解冻5-10分钟。
轻缓颠倒混匀,避免气泡,短暂离心(1000 rpm,10秒)。
反应体系配置(20 μL/反应):
预混液10 μL + 引物2 μL + 模板DNA 2 μL + RNase-free水6 μL。
建议设置3次技术重复及阴性对照(NTC)。
PCR扩增程序
预变性:95℃ 5分钟。
循环阶段(40 cycles):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(荧光采集)。
熔解曲线分析:60℃~95℃,0.5℃/步,验证扩增特异性。
结果判读
定性检测:Ct值≤35且熔解曲线单一峰判为阳性。
定量检测:通过标准曲线计算模板拷贝数。
注意事项

实验分区操作,避免气溶胶污染。
阳性对照需独立稀释,防止污染其他组分。
熔解曲线异常可能提示非特异性扩增,需复核引物设计或样本纯度。
储存与有效期
-20℃避光保存,有效期12个月。
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