背景[1-6]
小鼠心肌成纤维细胞试剂盒适合于培养小鼠的心肌成纤维细胞。本试剂盒包含：（1）OptiTDSTM小鼠心肌成纤维细胞组织解离液（2）小鼠心肌成纤维细胞组织处理缓冲液（3）小鼠心肌成纤维组织洗液（4）小鼠心肌成纤维细胞生长因子及血清（5）小鼠心肌成纤维细胞基础培养基（6）小鼠心肌成纤维组织预备液。
小鼠心肌成纤维细胞可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。心肌成纤维细胞分离自心脏组织；心脏由心肌细胞和非心肌细胞组成，非心肌细胞占细胞总数的70%，其中90%以上的非心肌细胞由心肌成纤维细胞组成。
成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。虽然心肌组织机械韧性很强，但利用试剂盒中提供的心肌组织分离体系来分离，EDTA/EGTA处理过的心肌组织片能使得心肌组织中成纤维细胞的一些功能特性发生改变，从而将心肌成纤维细胞分离开来。心肌成纤维细胞主要功能为对心肌细胞起结构支持作用并负责细胞基质外的合成，当心肌损伤时能产生旁分泌生长因子。心肌成纤维细胞是心脏结缔组织中最常见的细胞，可合成和分泌胶原纤维、弹性纤维、网状纤维及有机基质。
应用[7][8]
用于大麻素Ⅱ型受体激动剂对小鼠心肌梗死后心肌纤维化的影响及分子机制研究
随着溶栓、PCI介入以及冠状动脉旁路移植术等技术的快速发展和广泛应用,冠心病心肌梗死的死亡率有了明显的降低,然而由于心肌梗死后心脏调控机制失衡引起的心肌间质纤维化严重影响了心脏的舒张收缩功能,最终导致心衰,进而影响了患者生存率。目前临床针对缺乏特殊针对心肌纤维化的药物,主要通过改善心室重塑延缓纤维化的发生,临床使用的改善心室重塑的药物主要有:血管紧张素转换酶抑制剂类(ACEI)、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂类(ARBs)、醛固酮受体拮抗剂、β受体阻滞剂类等,虽有效果,但却面临治疗途径单一,治疗禁忌症的限制等问题,因此,急需寻找更多的有效的靶点和药物减少心梗后心肌纤维化的发生。大麻素激动剂通过和细胞表面的大麻素受体(cannabinoid receptor)进行结合进而发挥其作用,根据受体在人体的分布将其分为两类,即大麻素I型受体CB1和Ⅱ型受体CB2,CB1和CB2均为七跨膜的G蛋白藕联受体。其中CB1受体主要分布于中枢神经系统,而CB2受体主要分布在外周组织和免疫细胞。
方法:1.建立小鼠心肌梗死模型,术后给予AM1241治疗一周,术后一个月小动物超声观察心功能变化;取心脏组织石蜡包埋,组织天狼猩红染色,观察胶原面积;提取心脏组织蛋白,Western Blot检测纤维化相关分子指标变化。2.分离小鼠心脏成纤维细胞并鉴定其纯度,缺氧饥饿处理,体外模拟心梗环境,采用不同浓度AM1241处理缺氧饥饿的小鼠成纤维细胞,观察AM1241的最适浓度;分别采用免疫荧光染色激光共聚焦观察和Western Blot方法观察AM1241对缺氧饥饿的成纤维细胞转型、分泌功能的影响。3.采用流式细胞术,MDA、GSH、SOD试剂盒检测AM1241对缺氧饥饿处理的成纤维细胞氧化应激的影响;采用Nrf2 siRNA干扰技术和Western Blot技术探讨Nrf2和TGF-β1/Smad3信号通路在AM1241治疗过程中与氧化应激之间的机制关系。
参考文献
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[2]Wnt signaling pathway in cardiac fibrosis:New insights and directions[J].Hui Tao,Jing-Jing Yang,Kai-Hu Shi,Jun Li.Metabolism.2016(2)
[3]Extracellular matrix-mediated cellular communication in the heart[J].I?igo Valiente-Alandi,Allison E.Schafer,Burns C.Blaxall.Journal of Molecular and Cellular Cardiology.2016
[4]AMPK in cardiac fibrosis and repair:Actions beyond metabolic regulation[J].Evangelos P.Daskalopoulos,Cécile Dufeys,Luc Bertrand,Christophe Beauloye,Sandrine Horman.Journal of Molecular and Cellular Cardiology.2016
[5]The Living Scar–Cardiac Fibroblasts and the Injured Heart[J].Eva A Rog-Zielinska,Russell A Norris,Peter Kohl,Roger Markwald.Trends in Molecular Medicine.2015
[6]Redox-fibrosis:Impact of TGFβ1 on ROS generators,mediators and functional consequences[J].Kati Richter,Anja Konzack,Taina Pihlajaniemi,Ritva Heljasvaara,Thomas Kietzmann.Redox Biology.2015
[7]Reciprocal regulation of TGF-βand reactive oxygen species:A perverse cycle for fibrosis[J].Rui-Ming Liu,Leena P.Desai.Redox Biology.2015
[8]黎翔.大麻素Ⅱ型受体激动剂对小鼠心肌梗死后心肌纤维化的影响及分子机制研究[D].第四军医大学,2017.