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琼脂糖凝胶CL-6B的应用

发布日期:2020/3/26 11:29:53

背景及概述[1]

琼脂糖凝胶是琼脂中两个主要成分之一。其含量约占琼脂的70%。是一种非硫酸化的链状多聚体,由D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖残基交替排列而成。 琼脂糖凝胶是一种惰性基质,可制成柱管或平板状。其中以平板状更为普 遍,可用于电泳中分离不同大小或不同构型的核酸分子,然后利用溴乙锭(加 在电泳缓冲液中或在电泳后再染凝胶均可)在紫外线下出现的荧光以显示核酸分子在凝胶中的位置。

琼脂糖凝胶CL-6B由普通的分子筛填料Sepharose-6B和二溴丙醇或环氧氯丙烷反应而成, 具有较强的物理和化学稳定性, 可以承受较高的柱压。琼脂糖凝胶CL-6B本身是惰性物质, 但含有大量的β-半乳糖苷键。利用它的这种特性从蛇毒中成功地分离到基于立体专一性的、具有β-半乳糖苷键亲和性的C型凝集素。S型凝集素具有与含β-半乳糖基的糖缀合物结合的特性, 在适当的条件下也应能与琼脂糖凝胶CL-6B上的β-半乳糖苷键结合。

应用[1]

环节动物的S型凝集素在结构和生化性质上都有别于一般的S型凝集素,其在抗癌等研究方面的潜在价值重大。根据环节动物S型凝集素的性质,采用惰性分子筛填料Sepharose CL-6B(琼脂糖凝胶CL-6B)作为亲和色谱介质对蚯蚓S型凝集素进行了纯化。以2mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)-MEPBS(4mmol/Lβ-巯基乙醇,150mmol/L NaCl,20mmol/L磷酸盐,pH7.2)溶液作为平衡液,以氨水(150mmol/L,pH10.5)作为洗脱液得到的蛋白质经SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)、凝血实验及荧光检测等证明了其即为蚯蚓S型凝集素。该方法只需一个步骤即可从蚯蚓提取液中分离到纯的S型凝集素,比传统方法更加快捷高效,优越性明显。该方法的应用将有利于对环节动物S型凝集素的深入研究。

主要参考资料

[1] 琼脂糖凝胶CL-6B亲和色谱法一步纯化蚯蚓半乳凝素

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