背景[1-3]
人Α平滑肌肌动蛋白(Α-SMA)ELISA KIT是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附（elisa）法的快速检测试剂盒。往预先包被人α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
操作流程
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
肌动蛋白是一类形成微丝的球状多功能蛋白质。它基本上存在于所有真核细胞中，其中它可以以超过100μM的浓度存在;其质量约为42kDa，直径为4至7nm。
肌动蛋白是细胞中两种细丝的单体亚基：细丝，细胞骨架的三个主要成分之一，以及细丝，是肌细胞中收缩装置的一部分。它可以作为称为G-肌动蛋白（球状）的游离单体存在，或作为称为F-肌动蛋白（丝状）的线性聚合物微丝的一部分存在，这两者对于细胞的移动和收缩等重要的细胞功能是必不可少的。
应用[4][5]
用于气道上皮细胞白介素-25和α-平滑肌肌动蛋白在支气管哮喘气道重塑的相关性分析
支气管哮喘是由多种炎症细胞如嗜酸性粒细胞(EOS)、肥大细胞、T淋巴细胞及多种细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病,并且通常以气道上皮的结构改变为病理特征。支气管哮喘的三个主要病理改变包括：气道炎症、气道重塑及平滑肌功能紊乱,慢性炎症反应可以引起一些细胞因子和细胞介质的释放,这些炎症细胞因子和炎症介质可通过一定的途径引起哮喘气道的重塑。
炎症细胞因子白细胞介素-25(IL-25)是IL-17家族的成员之一,它在启动、促进和调节Th2型免疫反应中起重要作用,同时研究发现哮喘患者外周血及诱导痰中IL-25的水平明显增高,并且同时发现气道上皮内IL-25高表达的同时伴随哮喘早期气道重塑指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及气道粘膜下基底膜厚度明显增加。因此,哮喘气道上皮IL-25可能与哮喘的气道重塑存在一定的联系。
方法：通过用鸡卵白蛋白(OVA)雾化小鼠建造动物哮喘模型哮喘组,对照组雾化生理盐水,采用组织形态学观察(免疫组化)、酶联免疫反应、Western Blot等方法测定哮喘组与对照组小鼠血清、肺泡灌洗液及肺组织中IL-25及α-SMA的表达,采用SPSS20.0统计软件包进行统计学数据处理,所有数据均以均数和标准差表示,计量资料用t检验,检验水准a=0.05,P<0.05为有统计学意义。
参考文献
[1]Airway remodeling in asthma[J].Rabih Halwani,Saleh Al-Muhsen,Qutayba Hamid.Current Opinion in Pharmacology.2010(3)
[2]Bronchial Reactivity to Histamine Is Correlated With Airway Remodeling in Adults With Moderate to Severe Asthma[J].Naomi Tsurikisawa,Chiyako Oshikata,Takahiro Tsuburai,Hiroshi Saito,Kiyoshi Sekiya,Hidenori Tanimoto,Sayaka Takeichi,Hiroyuki Mitomi,Kazuo Akiyama.Journal of Asthma.2010(8)
[3]IL-25 and its Receptor(IL-25R)in Asthmatic Airways Inflammation and Airways Remodelling[J].Q.Meng,C.Fang,Y.H.Wang,Y.J.Liu,T.H.Lee,C.J.Corrigan,S.Ying.The Journal of Allergy and Clinical Immunology.2008(2)
[4]Cytokines and growth factors in airway remodeling in asthma[J].Taylor Doherty,David Broide.Current Opinion in Immunology.2007(6)
[5]周玲.气道上皮细胞白介素-25和α-平滑肌肌动蛋白在支气管哮喘气道重塑的相关性分析[D].山东大学,2014.