背景[1-3]
猪超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒用于检测血清等样本中超氧化物歧化酶(SOD)的含量。
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被目标物抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标物呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样本处理及要求
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于2000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8℃2000g离心30分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融
3.细胞培养物上清或其它生物标本：2000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
1.标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶解，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。
2.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
猪超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4-5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于超氧化物歧化酶（SOD）在原发性痛风性关节炎患者中的表达及其临床意义研究
检测不同分期的痛风患者外周血单个核细胞（PBMCs）中SOD1、SOD2的基因与蛋白的表达量、蛋白酶活性,以及血浆中SOD3蛋白浓度、蛋白酶活性,初步探讨SOD在原发性痛风性关节炎患者中的表达差异及其在痛风发病机制中的可能作用。
方法:（1）收集原发性痛风性关节炎急性期患者（AG）48例、间歇期患者（IG）48例、慢性期患者（CG）48例和健康体检者（HC）48例的空腹静脉血、临床资料及常规检查资料。
（2）利用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测其外周单个核细胞中SOD1、SOD2 mRNA的表达水平。
（3）利用蛋白质印迹法（Western blot）分别检测14例AG组、14例IG组、14例CG组、14例HC组PBMCs中SOD1、SOD2蛋白表达水平。
（4）利用酶联免疫吸附法分别检测14例AG组、14例IG组、14例CG组、14例HC组血浆中SOD3蛋白浓度。
（5）利用水溶性四唑盐（WST）显色法分别检测14例AG组、14例IG组、14例CG组、14例HC组PBMC中SOD1、SOD2酶活性和血浆中SOD3酶活性。采用SPSS 19.0统计软件进行分析,P<0.05认为差异有统计学意义。
血浆中SOD3蛋白浓度（ng/ml）在AG组、CG组、IG组、HC组中存在差异且具有统计学意义（F=2.892,P<0.05）。AG组血浆SOD3蛋白较HC组显著增高（P<0.01）,其余组间无统计学差异（P>0.05）。
结论:（1）原发性痛风患者体内外周血PBMCs处于氧化应激状态。（2）原发性痛风患者体内处于氧化应激状态。（3）SOD参与痛风性关节炎的急性炎症反应过程。（4）原发性痛风患者脂肪代谢紊乱、血管内皮损伤、动脉粥样硬化可能与线粒体内氧化应激有关。
参考文献
[1]Oxidative stress in biological systems and its relation with pathophysiological functions:the effect of physical activity on cellular redox homeostasis.[J].Kruk Joanna,Aboul-Enein Hassan Y,K?adna Aleksandra,Bowser Jacquelyn E.Free radical research.2019(5)
[2]Alpha-synuclein induces lysosomal rupture and cathepsin dependent reactive oxygen species following endocytosis.[J].David Freeman,Rudy Cedillos,Samantha Choyke,Zana Lukic,Kathleen McGuire,Shauna Marvin,Andrew M Burrage,Stacey Sudholt,Ajay Rana,Christopher O’Connor,Christopher M Wiethoff,Edward M Campbell.PLoS ONE.2017(4)
[3]CLICs-dependent chloride efflux is an essential and proximal upstream event for NLRP3 inflammasome activation.[J].Tang Tiantian,Lang Xueting,Xu Congfei,Wang Xiaqiong,Gong Tao,Yang Yanqing,Cui Jun,Bai Li,Wang Jun,Jiang Wei,Zhou Rongbin.Nature communications.2017(1)
[4]Impact of serum uric acid,albumin and their interaction on Parkinson’s disease.[J].Wang Lijun,Hu Wei,Wang Jun,Fang Fangfang,Cheng Guanliang,Jiang Yuzhang,Xiao Hang,Wan Qi.Neurological sciences:official journal of the Italian Neurological Society and of the Italian Society of Clinical Neurophysiology.2017(2)
[5]游智骁.超氧化物歧化酶（SOD）在原发性痛风性关节炎患者中的表达及其临床意义[D].川北医学院,2020.