在细胞培养过程中，经常少不了HEPES缓冲液。那么，HEPES缓冲液的配制和使用方法怎样呢?HEPES缓冲液是一种弱势，在开放式的培养条件中，若加入HEPES，可防止培养基内pH氧化升高，从而将PH维持在7.0左右。
HEPES分子量为238.31，化学名：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，分子式: C8H18N2O4S。
HEPES常用于生物缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2，用在生化诊断试剂盒、DNA/rna提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L。
关于HEPES 缓冲溶液的配制，不同的文献资料有不同的说法。根据用途，一种是单纯的HEPES+NaOH，另一种是HEPES+盐。
各种配制方法总结如下：
一、500ml 1 MHEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制
119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2)，然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。
二、加少量盐的HEPESBuffer配方(500ml)
HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，最后定容。
三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制
将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水，用0.5M NaOH调节至所需pH值，再用蒸馏水定容至100ml即可。
HEPES使用方法有两种：
(1)HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES，待溶后用lNNaOH 调pH至7.2，滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。
(2)亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L)，使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，最终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES贮存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中，用lN NaOH调pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，过滤除菌，分装小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。
需要注意的是，HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L，对细胞无毒性作用。一般情况下，浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。现在市售HEPES为约10g包装的小瓶，大家根据实际情况正确灵活配制就OK了。