背景[1-3]
猪谷胱甘肽S转移酶Π1(GSTΠ1)ELISA试剂盒用于检测血清及体液样本中谷胱甘肽S转移酶Π1(GSTΠ1)的含量检测。
猪谷胱甘肽S转移酶Π1(GSTΠ1)是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（elisa）。往预先包被猪谷胱甘肽S转移酶π1(GSTπ1)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪谷胱甘肽S转移酶π1(GSTπ1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
猪谷胱甘肽S转移酶Π1(GSTΠ1)ELISA试剂盒
标本要求
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于DDT降解菌Ochrobactrum sp.DDT-2谷胱甘肽S-转移酶的克隆、表达和功能研究
有机氯农药曾广泛用于农业害虫与公共卫生防治,虽早已被禁,但如DDT等及其主要代谢产物在自然环境中的残留依然可以检测出来,存在一定的健康与生态风险。谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）作为一类保守的具有多种功能的超基因家族酶系,普遍存在生物体中。GSTs主要功能是催化内源、外源等有毒物质形成低毒易溶于水的化合物而排出体外,减少或避免对机体造成损害。
通过对实验室保存的DDT降解菌Ochrobactrum sp.DDT-2进行全基因组测序分析,主要研究结果如下:（1）通过使用Illumina Hiseq和SOAPdenovo（v2.04）,测序、组装、优化和补洞后获得了DDT降解菌Ochrobactrum sp.DDT-2基因信息。通过组装序列、ncRNA信息、编码基因、COG、GO、KEGG功能注释,绘制得到了DDT降解菌Ochrobbactrum sp.DDT-2基因组圈图。预测全基因组注释中编号为U1GM001187的基因序列,编码谷胱甘肽S-转移酶,命名为dhc基因,作用于DDT→DDE的转化。
（2）利用PCR方法从DDT降解菌Ochrobactrum sp.DDT-2菌株中克隆到谷胱甘肽S-转移酶基因dhc,构建重组表达菌株,在IPTG（Isopropylβ-D-Thiogalactoside）的诱导下,在26kDa左右有明显的表达蛋白条带。试验表明其具有降解DDT、DDE和DDD的作用,DDT在dhc基因作用下降解为DDE,随后继续脱氯化氢生成DDMU,DDE和DDD都降解为DDMU。
（3）纯化经IPTG诱导的重组表达蛋白,研究其酶学基础特性。纯化后的蛋白酶可在一个较宽的温度（20-45℃）和pH（6.0-7.0）范围内具有降解作用,同时还能降解七氯、林丹、百菌清和β-666,通过对代谢产物的分析得到纯化酶对其作用途径是:β-HCH→五氯环己烯;林丹—→五氯环己烯→三氯苯;百菌清→1,3-二酰胺-四氯苯;七氯→外环氧七氯。研究获得的降解酶具有较好的降解能力,且具有较好的底物广泛性,有较好的潜在应用价值。
参考文献
[1]Aerobic Biodegradation of DDT by Advenella Kashmirensis and Its Potential Use in Soil Bioremediation[J].Chiraz Abbes,Ahlem Mansouri,Naima Werfelli,Ahmed Landoulsi.Soil and Sediment Contamination:An International.2018(6)
[2]Organohalide respiration in pristine environments:implications for the natural halogen cycle[J].Siavash Atashgahi,Max M.H?ggblom,Hauke Smidt.Environmental Microbiology.2018(3)
[3]Biochemistry of Catabolic Reductive Dehalogenation[J].Maeva Fincker,Alfred M.Spormann.Annual Review of Biochemistry.2017
[4]Concurrent Haloalkanoate Degradation and Chlorate Reduction by Pseudomonas chloritidismutans AW-1T[J].Peng Peng,Ying Zheng,Jasper J.Koehorst,Peter J.Schaap,Alfons J.M.Stams,Hauke Smidt,Siavash Atashgahi.Applied and Environmental Microbiology.2017(12)
[5]何怡雯.DDT降解菌Ochrobactrum sp.DDT-2谷胱甘肽S-转移酶的克隆、表达和功能研究[D].浙江大学,2019.