5,5′双二硫代(2-硝基苯甲酸)也称为DTNB或Ellman试剂。DTNB与巯基基团反应生成有色产物，是测量溶液中的半胱氨酸和其他游离巯基的可靠方法。DTNB可用于乙酰胆碱酯酶的检测。
DTNB 基本性质
中文名：5,5'-二硫双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)
英文名：5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid)
别名：DTNB, Ellman 试剂, 双(3-羧基-4-硝基苯基)二硫, 二硫代硝基苯甲酸, 6,6′-二硝基-3,3′-二硫代苯甲酸
分子式：[-SC6H3(NO2)CO2H]2
分子量：396.35
性状：淡黄色至黄色粉末
DTNB 与巯基反应机理与应用
含游离巯基基团的化合物（如半胱氨酸），其结构中的硫代阴离子(RS-)与DTNB2-反应生成有色物质2-硝基-5-硫代苯甲酸盐阴离子(TNB2-)和一种混合二硫化物(R-S-TNB-)。此反应的速率取决于多种因素：(1) 反应 pH 值、(2) 巯基的 pKa'和 (3) 空间和静电效应。
TNB2- 在412nm处14,150M-1 cm-1具有较高的摩尔吸收系数。在pH>7.3，吸收与pH变化影响极小。通过与含巯基基团化合物（如半胱氨酸）的标准曲线进行比较，可计算得到样品中的巯基含量。当pH 值在 7.6 至 8.6 之间，TNB 的消光值不受 pH变化的影响。不过，TNB 的消光值在其他溶剂中有所不同。
5,5'-二硫双(2-硝基苯甲酸)的特点
• 巯基测定 — 与游离（还原）巯基基团 (—SH) 定量反应，以生成可检测的 TNB 产物
• 比色检测 — 有色产物可在比色皿或微孔板中进行分光光度测量
• 成熟的分析方法 — 可利用消光系数计算或通过与半胱氨酸标准进行比较，对肽或蛋白巯基基团进行定量测定
5,5'-二硫双(2-硝基苯甲酸)的应用
测定蛋白质、多肽和组织中游离巯基的含量；
用于乙酰胆碱酯酶的检测；
柱前衍生HPLC法测定烷基硫醇；
可对半胱氨酸残基进行特异性标记。